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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 电泳、酶切的问题，谢谢各位大虾
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qnqfv

新虫 (初入文坛)

[求助] 电泳、酶切的问题，谢谢各位大虾

请问：我的PCR跑出的基因，有一个位置不对。。但是酶切的结果却和另外的一样，怎么回事啊？

PCR



酶切
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1楼 2012-01-10 17:27:29
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lxj341401

至尊木虫 (著名写手)
第一个图没有marker，不好说。
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2楼2012-01-10 22:41:20
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小丹木木

荣誉版主 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
很有可能是你PCR不大对的那个引物，与载体质粒基因组有较高的同源性，PCR引物识别位点错了，然后就错P了。而酶切一样的话，说明是单一酶切位点，目的基因没有问题，是PCR引物的问题。
你可以把引物和载体质粒基因组做一个同源分析或者BLAST一下，应该很快能找出问题的，祝你实验顺利。
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3楼2012-01-11 08:26:56
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qnqfv

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
楼: Originally posted by 小丹木木 at 2012-01-11 08:26:56:
很有可能是你PCR不大对的那个引物，与载体质粒基因组有较高的同源性，PCR引物识别位点错了，然后就错P了。而酶切一样的话，说明是单一酶切位点，目的基因没有问题，是PCR引物的问题。
你可以把引物和载体质粒基因 ...

非常感谢
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4楼2012-01-11 17:02:18
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qnqfv

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
楼: Originally posted by lxj341401 at 2012-01-10 22:41:20:
第一个图没有marker，不好说。

啊，没有贴上来
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5楼2012-01-11 17:03:03
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快乐的小傻瓜

木虫 (著名写手)

女神

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
第一个图是质粒么？相同质粒处于不同构型时电泳图谱不同，超螺旋、环、线
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怀一颗宽容的心去生活，再拥挤的世界也变得无限宽广，再平凡的人生也变得充满阳光。
6楼2012-01-11 17:33:46
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guojianping

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
PCR很可能P错地方的，酶切验证为准的，叫做严格验证，了不起测序去。以后贴图最起码写清楚哪个是哪个，这样叫别人猜的话很多人懒得看的
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7楼2012-01-11 20:43:26
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lixingliang

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
PCR假阳性很多，酶切相对精确，但测序是金标准。可以测一下看看
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我不管你看起看不起我，我都是个演员
8楼2012-01-12 08:21:10
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hyhl

铁杆木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
第一个图有可能是电泳的问题，即使你做了酶切，我觉得还是必须要测序才能确认你的PCR产物是否真正是你的目的基因，以及目的基因是否正确。
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9楼2012-01-12 10:18:02
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