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worm2010

金虫 (小有名气)

[求助] 求助!请问 NdeI 和EcoRI 同时做酶切可以吗?

用的是宝生物的这两种酶

但是目录上没有查到关于二者同时酶切的详细资料

求助有经验的兄弟姐妹们,这两种酶可以同时切吗?切几个小时

比较好呢?

一般双酶切DNA什么条件比较合适?(时间上)

平末端的连接条件是指什么?4度过夜?
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jia1012428

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

worm2010(金币+2): 2011-06-05 18:41:47
网上有很多关于双酶切共用的反应缓冲液的表,你查一下,可以发现两个酶的通用缓冲液是1xH buffer,再看一下两个酶的说明书,发现这两个酶在1xH buffer下的酶切效率都是100%,那么就把两个酶的酶切体系里的物质加到一起就行了,剩下的用水补到20微升,你也可以根据需要等比例放大。
反应时间2小时够了,如果觉得不放心可以加长时间,但不要超过4小时,长时间会造成错误切割。
酶切之后都是粘性末端,用solution 1连接,16度过夜。
2楼2011-06-05 17:56:00
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worm2010

金虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by jia1012428 at 2011-06-05 17:56:00:
网上有很多关于双酶切共用的反应缓冲液的表,你查一下,可以发现两个酶的通用缓冲液是1xH buffer,再看一下两个酶的说明书,发现这两个酶在1xH buffer下的酶切效率都是100%,那么就把两个酶的酶切体系里的物质加到 ...

说的很详细,非常感谢!
3楼2011-06-05 18:42:08
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worm2010

金虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by jia1012428 at 2011-06-05 17:56:00:
网上有很多关于双酶切共用的反应缓冲液的表,你查一下,可以发现两个酶的通用缓冲液是1xH buffer,再看一下两个酶的说明书,发现这两个酶在1xH buffer下的酶切效率都是100%,那么就把两个酶的酶切体系里的物质加到 ...

那 请问,酶切后的目的片段与质粒用T4DNA 连接酶4度过夜可以吗?
NdeI的说明书上说要用平滑末端的连接条件,因为它所切出的粘末端连接效率较低,所以我不太明白他上面说的平末端连接条件是什么,请问您知道吗?
4楼2011-06-05 18:45:43
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