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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 关于EcoRI的部分酶切
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酶切专家

金虫 (小有名气)

[求助] 关于EcoRI的部分酶切

我准备用EcoRI+XbaI在我的质粒上克隆外源基因，但酶切验证时发现在质粒上有两个EcoRI位点，所以不得不进行部分酶切。
我的计划是：先用XbaI进行完全酶切，然后加少量EcoRI，进行部分酶切（希望出现只在一个EcoRI位点切开的条带），然后回收在我希望的位点切开的那条带，进行克隆。
我已经尝试了一次，发现即使只酶切5分钟，质粒上的两个EcoRI都全切开了。大家有相关经验吗？
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1楼2012-03-17 16:51:50
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lixg

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
外源基因序列两端引物均添加XbaI 位点，重新扩增，连入克隆载体。克隆和表达载体均用XbaI 单酶切，连接，筛方向。
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7楼2012-03-18 08:30:23
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