应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】Sau3AI 部分酶切
91/1返回列表
查看: 1808  |  回复: 8
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

芥末蚕豆

铜虫 (初入文坛)

[交流] 【求助/交流】Sau3AI 部分酶切 已有4人参与

我想用Sau3AI 部分酶切，获得23kb-15kb的片段，但是每次酶切后，片段都比较弥散，从23kb到最小都有（本身总DNA就有一定的涂带）。调整酶切条件也没有得到单纯的23kb-15kb片段，不知道有没有做过这方面的，可以给我提供一些酶切的经验。谢谢了！
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
开心就好！
1楼 2010-12-01 21:34:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

scelab

荣誉版主 (文坛精英)

小木虫之有关部门负责人
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
dhd997(金币+1):good 2010-12-02 08:07:58
正常，切胶回收的时候在理论大小附近1~2mm切就好，
赞一下(2人) 回复此楼
小木虫之有关部门负责人
2楼2010-12-01 23:11:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

王家大成

木虫 (正式写手)

囧囧小虫
割胶回收就好了
回复此楼
一念起，万水千山；一念灭，沧海桑田！
3楼2010-12-02 01:02:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

brightfuture01

木虫之王 (文坛精英)

我爱打老虎

文献杰出贡献
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
dhd997(金币+2):谢谢交流 2010-12-02 08:08:10
Sau3AI 是四碱基识别内切酶，所以理论上256bp就有一个酶切位点。部分酶切的时候酶量及酶切时间要优化。我倒是优化过，但是我最后想拿的是3-10kb的片段。

不知道你提取的是环境样品的还是什么物种的DNA，如果是环境样品的，本身提取出来也就是23kb左右。

跑个低浓度过夜的胶，然后电洗脱回收，不要胶回收。即便是Qiagen的理论上能回收40kb的试剂盒，回收效果也是极其不理想。

有条件的话最好能用脉冲场电泳来跑胶。
赞一下(3人) 回复此楼
The world is a fine place and worth fighting for. I agree with the second part.
4楼2010-12-02 02:56:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

芥末蚕豆

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
Originally posted by brightfuture01 at 2010-12-02 02:56:15:
Sau3AI 是四碱基识别内切酶，所以理论上256bp就有一个酶切位点。部分酶切的时候酶量及酶切时间要优化。我倒是优化过，但是我最后想拿的是3-10kb的片段。

不知道你提取的是环境样品的还是什么物种的DNA，如果是 ...

我提的是链霉菌的总DNA,虽说提取出来的是23kb，但肯定比这个是要大一点，肯定是要切一下才能连接。我想问，你当时优化条件是怎么做的啊？我们实验室可能没有你说的回收条件，老师倒是说可以给我买试剂盒，但是大片段的试剂盒效果也不是很好，我怕买回来效果也不是很好！
赞一下 回复此楼
开心就好！
5楼2010-12-02 11:41:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

brightfuture01

木虫之王 (文坛精英)

我爱打老虎

文献杰出贡献
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
dhd997(金币+2):good 2010-12-02 12:38:33
怎么会没有我说的回收条件呢？买段透析袋，在电泳槽里就可以了，虽然没有办法低温。优化的时候要准备充足的DNA，保证每次的起始DNA量都是一样的，然后做一系列梯度的酶和酶切时间。然后跑电泳看看哪个酶切后条带集中在15-23kb左右。优化好了之后，正式试验的时候就按照这个体系来。

[ Last edited by brightfuture01 on 2010-12-2 at 12:27 ]
赞一下(2人) 回复此楼
The world is a fine place and worth fighting for. I agree with the second part.
6楼2010-12-02 12:25:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

芥末蚕豆

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
Originally posted by brightfuture01 at 2010-12-02 12:25:59:
怎么会没有我说的回收条件呢？买段透析袋，在电泳槽里就可以了，虽然没有办法低温。优化的时候要准备充足的DNA，保证每次的起始DNA量都是一样的，然后做一系列梯度的酶和酶切时间。然后跑电泳看看哪个酶切后条带集 ...

谢谢解答了！老师说透析袋回收率也很低，不知道从哪给我弄了点低熔点琼脂糖，但是那个琼脂糖我浓度配到1.2%了，也还是不凝固?不知道为什么？
赞一下 回复此楼
开心就好！
7楼2010-12-07 15:49:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

brightfuture01

木虫之王 (文坛精英)

我爱打老虎

文献杰出贡献
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
呵呵，纯菌的回收率低就低点呗，提个细菌总DNA还不很容易么。低熔点胶是进口的么？应该能凝的啊，不行就放在4度试试看能凝么。

低熔点胶倒是比较好用，完了切下来的胶稍微加热一下就融了，用琼脂糖酶消化的时候也很容易。

想问问你接下来是要连粘粒，作文库么？

[ Last edited by brightfuture01 on 2010-12-7 at 15:56 ]
赞一下(1人) 回复此楼
The world is a fine place and worth fighting for. I agree with the second part.
8楼2010-12-07 15:53:52
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

芥末蚕豆

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
Originally posted by brightfuture01 at 2010-12-07 15:53:52:
呵呵，纯菌的回收率低就低点呗，提个细菌总DNA还不很容易么。低熔点胶是进口的么？应该能凝的啊，不行就放在4度试试看能凝么。

低熔点胶倒是比较好用，完了切下来的胶稍微加热一下就融了，用琼脂糖酶消化的时候 ...

不知道老师从哪整的，一小瓶，连个标签也没有！是，之后要连接一下，然后转一下，做表达！不做文库！
赞一下 回复此楼
开心就好！
9楼2010-12-07 16:50:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 芥末蚕豆 的主题更新
91/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 机械专硕调剂 +3 笨笨兔子 2026-03-12 3/150 2026-03-15 20:02 by 栗子粥?
[考研] 326求调剂 +3 上岸的小葡 2026-03-15 4/200 2026-03-15 18:50 by 无际的草原
[考研] 070305求调剂 +3 mlpqaz03 2026-03-14 4/200 2026-03-15 11:04 by peike
[基金申请] 面上和青基一样限30页不合理 +5 wowsunflower 2026-03-10 7/350 2026-03-14 17:21 by kingkocxr
[考研] 331求调剂（0703有机化学 +5 ZY-05 2026-03-13 6/300 2026-03-14 10:51 by Jy?
[考研] 332分材料工程调剂 +3 莓好时光海苔 2026-03-09 3/150 2026-03-14 02:03 by JourneyLucky
[考研] 307求调剂 +7 超级伊昂大王 2026-03-10 7/350 2026-03-14 00:49 by JourneyLucky
[考研] 0703，333分求调剂 一志愿郑州大学-物理化学 +3 李魔女斗篷 2026-03-11 3/150 2026-03-13 22:24 by JourneyLucky
[考研] 281求调剂 +9 Koxui 2026-03-12 11/550 2026-03-13 20:50 by Koxui
[考研] 332求调剂 +3 Zz版 2026-03-13 3/150 2026-03-13 20:36 by 18595523086
[考研] 材料工程调剂 +4 咪咪空空 2026-03-11 4/200 2026-03-13 19:57 by JourneyLucky
[考研] 0703化学求调剂 +7 绿豆芹菜汤 2026-03-12 7/350 2026-03-13 17:25 by njzyff
[考研] 293求调剂 +3 世界首富 2026-03-11 3/150 2026-03-13 16:27 by JourneyLucky
[考研] 【0856】化学工程（085602）313 分，本科学科评估A类院校化学工程与工艺，诚求调剂 +7 小刘快快上岸 2026-03-11 7/350 2026-03-13 16:06 by ruiyingmiao
[考研] 307求调剂 +5 超级伊昂大王 2026-03-12 5/250 2026-03-13 15:56 by 棒棒球手
[考研] 工科材料085601 279求调剂 +8 困于星晨 2026-03-12 10/500 2026-03-13 15:42 by ms629
[考研] 0817化学工程与技术考研312分调剂 +3 T123 tt 2026-03-12 3/150 2026-03-13 10:49 by houyaoxu
[考研] 296求调剂 +3 大口吃饭 身体健 2026-03-13 3/150 2026-03-13 10:31 by 学员8dgXkO
[考研] 化工0817调剂 +8 灿若星晨 2026-03-10 8/400 2026-03-10 22:44 by 星空星月
[考研] 0856材料与化工353分求调剂 +11 NIFFFfff 2026-03-09 11/550 2026-03-10 18:36 by suyuanhai
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭