| 查看: 2805 | 回复: 30 | |||
[交流]
双酶切，连接，转化问题 已有16人参与
|
|||
|
最近做转化，结果很郁闷，跟各位交流一下 我用的载体是一个1300改造后的载体，别人给的，卡那抗性。自己的片段1500bp，是从另一个载体上酶切得到，两端的酶切位点分别是EcoR l 和 Hind lll ，1300载体也用EcoR l 和 Hind lll 酶切后，回收大片段，用Takara 的T4 连接酶 16°C 反应过夜；转化涂板。 现在问题来了，涂平板长的菌都是一片一片的，很难有单菌落。图中是我用了10微升的菌液涂卡那板，结果长成这个样子。我之前做转化从来没有碰到过这种情况，各位虫子有没有什么好的建议？此外，我挑出几个菌斑摇菌，加了卡那抗生素，抽质粒后，再进行双酶切，怎么都得不得2条带，也就是没有我的目的片段，实在是不明白了，连接不成功还能长这么多的菌？哪位高手分析下啊啊啊~  [ Last edited by zjuwrx on 2012-5-8 at 14:13 ] |
回复此楼» 猜你喜欢
留学--博士招生
已经有16人回复
-
化学工程，本211，求调剂，ab区不限
已经有4人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有211人回复
-
湖北师范大学招调剂啦
已经有8人回复
-
邵阳学院食品与化学工程学院硕士调剂
已经有0人回复
-
天津商业大学 生物与医药课题组招生
已经有0人回复
-
生物化工学硕招收调剂
已经有0人回复
-
广东石油化工学院2026年硕士研究生需要多名生物，制药工程，食品专业的调剂生
已经有0人回复
-
317分 一志愿江南大学 化学工程学硕 求调剂
已经有6人回复
-
化工申博
已经有3人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 关于双酶切的酶的失活问题
已经有6人回复
- XhoI和NcoI双酶切之后连接转化不长克隆
已经有22人回复
- 求助--双酶切连接构质粒
已经有15人回复
- 酶切、连接和转化
已经有9人回复
- pet28a双酶切出现这种情况
已经有10人回复
- PCR产物双酶切遇到问题，求救！！！
已经有7人回复
- pET28a双酶切后连接目的基因，什么也不长。。。
已经有23人回复
- 有没有用过XmnI这个酶的?酶切后连接需要注意什么问题么？
已经有12人回复
- 单酶切的大片段连接转化及多个片段的连接转化问题
已经有8人回复
- 双酶切之后，线状质粒的连接问题
已经有13人回复
- 酶切酶连转化后单克隆检测不对
已经有8人回复
- 双酶切后目的条带的疑问？
已经有8人回复
- 载体和酶切片段连接的问题
已经有5人回复
- 酶切过DNA片段放了一周还能连接吗
已经有18人回复
- （侯氏出品）双酶切连接反应之全攻略
已经有89人回复
- 双酶切粘性末端连接不上
已经有21人回复
- 酶切后未纯化连接出现的问题
已经有18人回复
- 连接与转化问题
已经有5人回复
- 转化克隆的问题
已经有5人回复
- 将质粒上紧挨着的两个酶切位点进行双酶切后连接外源基因片段，是不是不好连接？
已经有13人回复
- PCR ， 双酶切，连接问题
已经有17人回复
- 双酶切连接表达载体，两个月都没做出来，问题到底出在哪里呢~？求指点
已经有52人回复
- 【求助/交流】关于酶切产物连接的一点问题
已经有13人回复
- 【求助/交流】双酶切求助
已经有19人回复
- 【求助/交流】双酶切的问题哦
已经有18人回复
所以我就不幸中枪了~
25楼2012-05-09 19:46:21
千年一雨
木虫 (正式写手)
- 应助: 6 (幼儿园)
- 金币: 3840.5
- 散金: 301
- 红花: 4
- 帖子: 398
- 在线: 434.9小时
- 虫号: 1089519
- 注册: 2010-09-04
- 专业: 生物化学
9楼2012-05-08 21:35:54
2楼2012-05-08 14:51:29
lxj341401
至尊木虫 (著名写手)
- MolEPI: 58
- 应助: 388 (硕士)
- 贵宾: 0.238
- 金币: 17138.7
- 红花: 43
- 帖子: 2251
- 在线: 712.4小时
- 虫号: 111074
- 注册: 2005-11-20
- 专业: 生物化学
3楼2012-05-08 18:02:08
xiazhiwuxie
银虫 (小有名气)
- 应助: 24 (小学生)
- 金币: 101.6
- 散金: 63
- 红花: 2
- 帖子: 94
- 在线: 40.4小时
- 虫号: 1149752
- 注册: 2010-11-18
- 性别: MM
- 专业: 基因表达调控与表观遗传学
4楼2012-05-08 18:31:29
liaotiantian
铜虫 (小有名气)
- 应助: 6 (幼儿园)
- 金币: 186.5
- 散金: 5
- 帖子: 94
- 在线: 56.8小时
- 虫号: 1483038
- 注册: 2011-11-08
- 性别: MM
- 专业: 作物分子育种
5楼2012-05-08 18:39:13
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
|
本帖内容被屏蔽 |
6楼2012-05-08 20:18:41
liuyu_sdili
木虫 (正式写手)
- MolEPI: 1
- 应助: 53 (初中生)
- 金币: 3045.9
- 散金: 15
- 红花: 2
- 帖子: 394
- 在线: 311.7小时
- 虫号: 1130112
- 注册: 2010-10-23
- 性别: GG
- 专业: 微生物生理与生物化学
7楼2012-05-08 20:21:32
dearesthebe
铜虫 (初入文坛)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 175.8
- 帖子: 14
- 在线: 9.2小时
- 虫号: 1484372
- 注册: 2011-11-09
- 专业: 微生物生理与生物化学
8楼2012-05-08 21:24:44
10楼2012-05-09 09:22:26
