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双酶切，连接，转化问题已有16人参与
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最近做转化，结果很郁闷，跟各位交流一下 我用的载体是一个1300改造后的载体，别人给的，卡那抗性。自己的片段1500bp，是从另一个载体上酶切得到，两端的酶切位点分别是EcoR l 和 Hind lll ，1300载体也用EcoR l 和 Hind lll 酶切后，回收大片段，用Takara 的T4 连接酶 16°C 反应过夜；转化涂板。 现在问题来了，涂平板长的菌都是一片一片的，很难有单菌落。图中是我用了10微升的菌液涂卡那板，结果长成这个样子。我之前做转化从来没有碰到过这种情况，各位虫子有没有什么好的建议？此外，我挑出几个菌斑摇菌，加了卡那抗生素，抽质粒后，再进行双酶切，怎么都得不得2条带，也就是没有我的目的片段，实在是不明白了，连接不成功还能长这么多的菌？哪位高手分析下啊啊啊~  [ Last edited by zjuwrx on 2012-5-8 at 14:13 ] |
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所以我就不幸中枪了~
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