双酶切，连接，转化问题 - 分子生物 - 综合其他 - 第2页小木虫论坛-学术科研互动平台

11楼2012-05-09 09:34:38

zjuwrx

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3楼: Originally posted by lxj341401 at 2012-05-08 18:02:08:
检查下kan是否失效。

怎么检测呢？用不抗kan的菌试试？

12楼2012-05-09 09:35:38

zjuwrx

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4楼: Originally posted by xiazhiwuxie at 2012-05-08 18:31:29:
强烈建议你换平板，不行的话换感受态

感受态应该没问题，跟之前的实验用的是同一批

13楼2012-05-09 09:36:32

zjuwrx

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5楼: Originally posted by liaotiantian at 2012-05-08 18:39:13:
换新的感受态，换新的kan，加的时候培养基温度不要太高

感受态应该是好的，之前也在用。看来是kan的问题了

14楼2012-05-09 09:37:09

zjuwrx

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6楼: Originally posted by wcwluwei at 2012-05-08 20:18:41:
卡纳重新配估计就是这个浓度出问题了

嗯，大家都想到了这个问题，我上个月配的，这么快就不管用了吗

15楼2012-05-09 09:37:57

zjuwrx

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7楼: Originally posted by liuyu_sdili at 2012-05-08 20:21:32:
把感受态找个抗生素平板涂布一下，看看是不是感受态有问题~~~

感受态之前也在用，应该是好的

16楼2012-05-09 09:38:44

zjuwrx

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8楼: Originally posted by dearesthebe at 2012-05-08 21:24:44:
应该是抗生素不好用了
之前我也遇到过这种情况，长了一满板，而且菌落PCR验证也不对

我是做TA克隆，后来换了新的抗生素，外加蓝白筛选，验证成功了

嗯，谢谢，我也决定重新配一下看看

17楼2012-05-09 09:39:56

zjuwrx

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10楼: Originally posted by 芥末猫 at 2012-05-09 09:22:26:
我最近涂板也总出现类似的问题，后来把菌液稀释了十倍重新涂，还是这个样，请问你的问题解决了吗？到底是什么原因啊？谢谢

目前还没解决。我个人感觉感受态应该没问题，因为之前一直在用。我决定重新配kan试试

18楼2012-05-09 09:42:36

zhsDONG

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★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-05-09 13:54:32

可能是卡那放久了失效或浓度过低或在倒平板时温度过高，还有可能是感受态被污染了，不过可以先通过你原有的质粒大小判断你提取的质粒大小是否正确。可进一步确定问题的所在

19楼2012-05-09 09:44:00

蚊在江湖

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像是抗生素失效

20楼2012-05-09 10:16:16