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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 双酶切，连接，转化问题
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dearesthebe

铜虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
15楼: Originally posted by zjuwrx at 2012-05-09 09:37:57:
嗯，大家都想到了这个问题，我上个月配的，这么快就不管用了吗

抗生素分装好后，最好在-30里面存放，不要放在4度~
现化现用~~
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21楼2012-05-09 13:59:28
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547star

木虫 (著名写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
污染,抗生素失效,重新准备材料或者多做对照.
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为什么
22楼2012-05-09 14:45:38
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137167741

至尊木虫 (著名写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
染菌可能性比较大了，还有就是抗生素失效了，一般来说，是不会长着的么多的。
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总有一天我要修改用户名。
23楼2012-05-09 16:35:25
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超然渡陈

金虫 (小有名气)
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
小丹木木: 金币+1, 鼓励交流 2012-05-10 13:48:17
第一个可能像大家说的抗生素出问题了，但是不排除你的载体酶切效果不好。比如有部分载体没有切开，或者部分载体是单酶切，在挖胶回收的时候很难分开，这种情况连接转化往往也会导致长满板，而且都是没有目的片段的空载体。
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24楼2012-05-09 17:00:27
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zjuwrx

银虫 (小有名气)
zjuwrx: 回帖置顶 2012-05-11 19:17:31
非常感谢楼上的各位！
原因找到了！感受态有问题。之前用Amp和奇霉素筛选都没问题，我用Kan 筛选总是做不好，原来感受态细胞有kan抗性  所以我就不幸中枪了~
跟别人要了新的感受态，明天信心满满继续奋斗实验~~~
虽然不一一回复了，但还是再次感谢各位！
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25楼2012-05-09 19:46:21
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xiongyaoling

金虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
11楼: Originally posted by zjuwrx at 2012-05-09 09:34:38:
上个月刚配的，这么快就失效了吗？一般抗生素在-20°C 能存放多久？

我配的放-20一年以上都没有问题的
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26楼2012-05-10 10:06:19
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xiongyaoling

金虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
我觉得你应该做个阳性对照和阴性对照，这样能比较好的看出是感觉态的问题还是抗生素的问题，希望你的问题可以尽快解决！
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27楼2012-05-10 10:08:19
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zjuwrx

银虫 (小有名气)
引用回帖:
26楼: Originally posted by xiongyaoling at 2012-05-10 10:06:19:
我配的放-20一年以上都没有问题的

嗯 已经验证了是感受态的问题了，谢谢~
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28楼2012-05-11 19:17:08
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yanhua_2006

铁杆木虫 (著名写手)
29楼2012-05-11 19:46:37
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yanhua_2006

铁杆木虫 (著名写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
恭喜找到了问题，呵呵。还好没有耽误太长时间
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30楼2012-05-11 19:46:53
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