双酶切，连接，转化问题 - 分子生物 - 综合其他 - 第3页小木虫论坛-学术科研互动平台

21楼2012-05-09 13:59:28

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木虫 (著名写手)

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污染,抗生素失效,重新准备材料或者多做对照.

为什么

22楼2012-05-09 14:45:38

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至尊木虫 (著名写手)

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染菌可能性比较大了，还有就是抗生素失效了，一般来说，是不会长着的么多的。

总有一天我要修改用户名。

23楼2012-05-09 16:35:25

超然渡陈

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小丹木木: 金币+1, 鼓励交流 2012-05-10 13:48:17

第一个可能像大家说的抗生素出问题了，但是不排除你的载体酶切效果不好。比如有部分载体没有切开，或者部分载体是单酶切，在挖胶回收的时候很难分开，这种情况连接转化往往也会导致长满板，而且都是没有目的片段的空载体。

24楼2012-05-09 17:00:27

zjuwrx

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zjuwrx: 回帖置顶 2012-05-11 19:17:31

非常感谢楼上的各位！

原因找到了！感受态有问题。之前用Amp和奇霉素筛选都没问题，我用Kan 筛选总是做不好，原来感受态细胞有kan抗性

所以我就不幸中枪了~
跟别人要了新的感受态，明天信心满满继续奋斗实验~~~

虽然不一一回复了，但还是再次感谢各位！

25楼2012-05-09 19:46:21

xiongyaoling

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引用回帖:

11楼: Originally posted by zjuwrx at 2012-05-09 09:34:38:
上个月刚配的，这么快就失效了吗？一般抗生素在-20°C 能存放多久？

我配的放-20一年以上都没有问题的

26楼2012-05-10 10:06:19

xiongyaoling

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我觉得你应该做个阳性对照和阴性对照，这样能比较好的看出是感觉态的问题还是抗生素的问题，希望你的问题可以尽快解决！

27楼2012-05-10 10:08:19

zjuwrx

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引用回帖:

26楼: Originally posted by xiongyaoling at 2012-05-10 10:06:19:
我配的放-20一年以上都没有问题的

嗯已经验证了是感受态的问题了，谢谢~

28楼2012-05-11 19:17:08

yanhua_2006

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29楼2012-05-11 19:46:37

yanhua_2006

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恭喜找到了问题，呵呵。还好没有耽误太长时间

30楼2012-05-11 19:46:53