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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 双酶切，连接，转化问题
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zjuwrx

银虫 (小有名气)

[交流] 双酶切，连接，转化问题 已有16人参与

最近做转化，结果很郁闷，跟各位交流一下

我用的载体是一个1300改造后的载体，别人给的，卡那抗性。自己的片段1500bp，是从另一个载体上酶切得到，两端的酶切位点分别是EcoR l 和 Hind lll ，1300载体也用EcoR l 和 Hind lll 酶切后，回收大片段，用Takara 的T4 连接酶 16°C 反应过夜；转化涂板。

现在问题来了，涂平板长的菌都是一片一片的，很难有单菌落。图中是我用了10微升的菌液涂卡那板，结果长成这个样子。我之前做转化从来没有碰到过这种情况，各位虫子有没有什么好的建议？此外，我挑出几个菌斑摇菌，加了卡那抗生素，抽质粒后，再进行双酶切，怎么都得不得2条带，也就是没有我的目的片段，实在是不明白了，连接不成功还能长这么多的菌？哪位高手分析下啊啊啊~

[ Last edited by zjuwrx on 2012-5-8 at 14:13 ]
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1楼 2012-05-08 13:22:49
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xiazhiwuxie

银虫 (小有名气)
★
amisking: 金币+1, 鼓励发帖交流问题。 2012-05-08 20:37:13
强烈建议你换平板，不行的话换感受态
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4楼2012-05-08 18:31:29
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lxj341401

至尊木虫 (著名写手)
检查下kan是否失效。
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3楼2012-05-08 18:02:08
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liaotiantian

铜虫 (小有名气)
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
amisking: 金币+1, 鼓励发帖交流问题。 2012-05-08 20:37:18
换新的感受态，换新的kan，加的时候培养基温度不要太高
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5楼2012-05-08 18:39:13
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wcwluwei

禁虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
本帖内容被屏蔽
6楼2012-05-08 20:18:41
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