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huajin2628

金虫 (正式写手)

[求助] 转化克隆的问题

构建质粒,连接转化老是不成功,大致情况如下:     载体pCS2,插入片段约800bp,酶切位点BamH1、Cla1,全式金T4 DNA Ligase,粘性末端连接!

     载体和插入片段都是从原载体双酶切切下的,应该没有问题,本人怀疑是连接时出了问题,
     请各位大侠给分析一下可能是那一步出的问题,给点建设性意见,小弟拜谢了……
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寓念于风
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da_da

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
1楼: Originally posted by huajin2628 at 2011-11-18 13:07:56:
构建质粒,连接转化老是不成功,大致情况如下:     载体pCS2,插入片段约800bp,酶切位点BamH1、Cla1,全式金T4 DNA Ligase,粘性末端连接!

     载体和插入片段都是从原载体双酶切切下的,应该没有问题,本 ...

说具体点,大家才好给你帮助啊
心有多大,江湖就有多大!
2楼2011-11-18 14:02:52
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liuxing5157

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

连接是目的基因,载体的浓度?连接体系?转化后的结果?
说说,我们才可能帮上忙。
3楼2011-11-18 22:20:22
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空谷幽风

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

huajin2628: 回帖置顶 2012-11-26 14:04:24
a?,c??ae~?a,EURc§?c?μé-,cs,,a‘?é?“i1/4?i1/4?i1/4?i1/4?
4楼2011-11-18 22:27:17
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huajin2628

金虫 (正式写手)

引用回帖:
62462楼: Originally posted by huajin2628 at 2011-11-18 13:07:56
构建质粒,连接转化老是不成功,大致情况如下:     载体pCS2,插入片段约800bp,酶切位点BamH1、Cla1,全式金T4 DNA Ligase,粘性末端连接!

     载体和插入片段都是从原载体双酶切切下的,应该没有问题,本人 ...

5楼2012-11-30 10:14:51
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aoda123

木虫 (正式写手)

请教楼主,从你选的两个酶切位点上切下的片段是多大?
               还有就是,pCS2空载体表达蛋白激发光是红色码?
身体健康,工作顺利
6楼2013-04-25 16:18:52
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