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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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mengxibio

新虫 (小有名气)

[交流] 做克隆出了很诡异的问题 已有9人参与

在做克隆,向感受态细胞导入载体出问题了。
向感受态细胞导入载体(上有抗amp位点,以及蓝白斑的位点)
结果,negative(纯的感受态细胞,没有导入载体)上出现大量蓝斑,而且其他几板普遍出现大量蓝斑,白斑几乎没有
之后我做菌落pcr,证明包括negative和其他几板上的蓝斑菌的确没有导入载体

问题是什么,操作上绝没有问题,我和另外一个人先后做了两遍,同样的结果

现在就怀疑是感受态细胞的问题,是一个师兄自己做的。但是这样的感受态细胞也太可怕了吧,不包括载体(已经用引物,做pcr证明),但是却含有抗amp基因,含有蓝白斑所需的基因

大家认为什么原因呢,排除操作上的原因
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空谷幽风

金虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
从其他公司买几支感受态试试
a?,c??ae~?a,EURc§?c?μé-,cs,,a‘?é?“i1/4?i1/4?i1/4?i1/4?
2楼2011-08-09 12:26:33
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mengxibio

新虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 空谷幽风 at 2011-08-09 12:26:33:
从其他公司买几支感受态试试

已经订了生工的成品,然后做下看看,估计就是感受态的问题
3楼2011-08-09 12:57:46
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wzqno

金虫 (小有名气)

★ ★
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西瓜(金币+1): 有可能 2011-08-10 17:58:38
是不是板子的amp失效了,再说了可以自己做感受态细菌啊,没啥难度啊
4楼2011-08-09 13:49:47
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anlewo7777

木虫 (正式写手)

★ ★ ★ ★
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1949stone(金币+3): 有见地 2011-08-09 16:58:13
感受态细菌菌株应该是半乳糖苷酶缺陷型菌株,因为导入的质粒引入了菌体缺失的一条半乳糖苷酶肽段,和菌株有的一个肽段互补而有半乳糖苷酶活性,从而降解X-gal产生蓝色。你要是想查原因,可以看你的感受态菌株的说明,看是不是半乳糖苷酶缺陷型
5楼2011-08-09 14:06:41
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mengxibio

新虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by wzqno at 2011-08-09 13:49:47:
是不是板子的amp失效了,再说了可以自己做感受态细菌啊,没啥难度啊

没有失效,这个肯定的。最近时间紧迫,想尽快结束实验
6楼2011-08-09 16:38:26
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mengxibio

新虫 (小有名气)

引用回帖:
5楼: Originally posted by anlewo7777 at 2011-08-09 14:06:41:
感受态细菌菌株应该是半乳糖苷酶缺陷型菌株,因为导入的质粒引入了菌体缺失的一条半乳糖苷酶肽段,和菌株有的一个肽段互补而有半乳糖苷酶活性,从而降解X-gal产生蓝色。你要是想查原因,可以看你的感受态菌株的说 ...

蓝白斑原理我懂的。用的感受态是一个师兄自己做的。我们实验室是这样,做感受态时做一大批,实验室共用
7楼2011-08-09 16:40:06
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huguangdong

至尊木虫 (职业作家)


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阴性变蓝的确说不过去,怎么感受态里面难道本来就有自连的T载体?很诡异,既然你操作没问题只能换感受态了。
8楼2011-08-09 17:07:07
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wzqno

金虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
6楼: Originally posted by mengxibio at 2011-08-09 16:38:26:
没有失效,这个肯定的。最近时间紧迫,想尽快结束实验

你们实验室有没有DH5a大肠杆菌或者top10啊??还是自己做感受态吧,转化效率也可以很高的
9楼2011-08-09 17:32:16
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weiwei888

禁虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
本帖内容被屏蔽

10楼2011-08-09 17:57:56
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