| 查看: 2767 | 回复: 24 | ||||
[交流]
【求助/交流】急！克隆快做了一个月了，就是做不出来 已有20人参与
|
|
TA 克隆 载体：pMD 18-T(Takara) 感受态：DH5a (天根) 实验流程是基本按照分子克隆上说的 PCR产物做了纯化，由于浓度比较低，所以 载体：0.5ul PCR产物：4.5ul Solution I: 5ul 14-16°连接过夜 转化用100ul的感受态细胞 热激什么的都没有问题，复苏后浓缩成100ul全部涂板，但是就是不长东西。做了阳性对照，也没长。好奇怪啊，不知道是哪里出了问题。 |
回复此楼» 猜你喜欢
留学--博士招生
已经有16人回复
-
化学工程，本211，求调剂，ab区不限
已经有4人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有244人回复
-
湖北师范大学招调剂啦
已经有9人回复
-
邵阳学院食品与化学工程学院硕士调剂
已经有0人回复
-
天津商业大学 生物与医药课题组招生
已经有0人回复
-
生物化工学硕招收调剂
已经有0人回复
-
广东石油化工学院2026年硕士研究生需要多名生物，制药工程，食品专业的调剂生
已经有0人回复
-
317分 一志愿江南大学 化学工程学硕 求调剂
已经有6人回复
-
化工申博
已经有3人回复
» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 6%变性聚丙烯酰胺凝胶总是凝的不好 求指点 急啊 谢谢了
已经有43人回复
- 做一个克隆所需的最短时间？比比谁更高效快速！
已经有39人回复
- 做克隆出了很诡异的问题
已经有14人回复
- 【求助/交流】PCR产物切胶回收后可不可以加A尾,做TA克隆，急！希望高手们能帮帮忙！
已经有9人回复
susizheng
木虫 (著名写手)
我們是糖 甜到憂傷
- MolEPI: 10
- 应助: 130 (高中生)
- 贵宾: 0.008
- 金币: 4738.3
- 散金: 2273
- 红花: 56
- 帖子: 2308
- 在线: 740.7小时
- 虫号: 642666
- 注册: 2008-11-01
- 性别: GG
- 专业: 有机合成
2楼2010-12-28 14:08:49
3楼2010-12-28 14:18:43
lhwei1987
铁杆木虫 (正式写手)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 7542.9
- 散金: 144
- 红花: 3
- 帖子: 393
- 在线: 288.5小时
- 虫号: 844109
- 注册: 2009-09-09
- 性别: GG
- 专业: 微生物学
4楼2010-12-28 15:26:09
天使托
专家顾问 (职业作家)
T.Shen
-
专家经验: +57 - MolEPI: 106
- 应助: 95 (初中生)
- 贵宾: 0.263
- 金币: 16334.8
- 散金: 593
- 红花: 74
- 沙发: 9
- 帖子: 3653
- 在线: 289小时
- 虫号: 441757
- 注册: 2007-10-27
- 专业: 微生物生理与生物化学
- 管辖: 微生物
★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
dhd997(金币+3):good 2010-12-29 17:06:49
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
dhd997(金币+3):good 2010-12-29 17:06:49
|
建议： 1:重新做感受态细胞，细胞并不是浓度越大越好，我们一般是50-60ul，再转化； 2：重新连接，把连接体系可以稍微变一下，DNA量可以稍微加大一些，一般如果没有连上的话，细胞再好，也不会长的，不知道你的质粒是什么抗性，当然了也可以把抗生素浓度降低一些！ 3：连接时间可以长一些，一般都是过夜连接，记得我上次连接几个基因，连了7，8个小时吧，转化之后涂布就长了几个，可是验证是正确的，后来连接一个基因，连接了15个小时吧，然后涂布，长的很多，挑了几个验证，都是正确的！ |
5楼2010-12-28 15:30:25
6楼2010-12-28 15:48:16
poog502
木虫 (正式写手)
- 应助: 9 (幼儿园)
- 金币: 2810.4
- 散金: 1115
- 红花: 8
- 帖子: 953
- 在线: 493.3小时
- 虫号: 723755
- 注册: 2009-03-16
- 专业: 果树学
7楼2010-12-28 15:53:00
poog502
木虫 (正式写手)
- 应助: 9 (幼儿园)
- 金币: 2810.4
- 散金: 1115
- 红花: 8
- 帖子: 953
- 在线: 493.3小时
- 虫号: 723755
- 注册: 2009-03-16
- 专业: 果树学
8楼2010-12-28 15:53:44
9楼2010-12-29 16:47:25
10楼2010-12-29 17:01:47
