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xuexue1204

铜虫 (小有名气)

★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
dhd997(金币+1):鼓励交流 2010-12-30 09:03:51
PMD-18T的连接效率是很高的,基本都能连上,有可能的你的连接体系不合适,那样也不会长的
共同学习,共同进步,共同提高,加油!
11楼2010-12-29 21:06:44
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犹寒

铁虫 (初入文坛)

★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
dhd997(金币+1):鼓励交流 2010-12-30 09:03:59
你的PCR产物是用什么纯化的,是割胶回收还是直接用什么?
12楼2010-12-29 21:45:32
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Arrennew

铁杆木虫 (正式写手)

用别人的平板试试
生命不息,探索不止。
13楼2010-12-29 22:20:43
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小晓

金虫 (正式写手)

★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
rainwander(金币+2):鼓励积极参与~~~ 2011-01-01 00:57:45
你用什么酶做的PCR?确定末端有A吧?
主要就三个点关键:
1.感受态的效率,这个可以转个质粒看看,计算下效率有多高;
2.载体和片段质量,载体不要反复冻融,要不然末端被破坏了,保证载体浓度;回收的片段检测下浓度,片段浓度低于100ng/ul 肯定不大好
3.载体和片段连接比例,这个参考手册上的吧 一般是片段高点效果好
做最好的自己
14楼2010-12-30 12:37:32
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gongeleven

铁杆木虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
楼主所说的阳性对照,是不是转化质粒的?
15楼2010-12-30 13:07:01
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hfkset

铜虫 (初入文坛)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
克隆很简单的,不要有压力,相信自己
16楼2010-12-30 13:12:04
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nutplay

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
Originally posted by gongeleven at 2010-12-30 13:07:01:
楼主所说的阳性对照,是不是转化质粒的?

嗯,是质粒来的
17楼2010-12-30 14:16:54
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nutplay

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
Originally posted by 犹寒 at 2010-12-29 21:45:32:
你的PCR产物是用什么纯化的,是割胶回收还是直接用什么?

割胶回收试剂盒纯化
18楼2010-12-30 14:17:44
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nutplay

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
Originally posted by 小晓 at 2010-12-30 12:37:32:
你用什么酶做的PCR?确定末端有A吧?
主要就三个点关键:
1.感受态的效率,这个可以转个质粒看看,计算下效率有多高;
2.载体和片段质量,载体不要反复冻融,要不然末端被破坏了,保证载体浓度;回收的片段检测 ...

用taq酶~载体都是在冰上融的,而且换过新的,用了没几次
19楼2010-12-30 14:19:14
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xiaoee2728

金虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
我觉得可能是试剂盒的问题,换一个新的试试,有时候就是这种最不可能是问题的环节成为问题。
似水流年
20楼2010-12-30 22:14:35
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