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xuexue1204

铜虫 (小有名气)

应助: 9 (幼儿园)
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在线: 50小时
虫号: 1165636
注册: 2010-12-08
性别: MM
专业: 疫苗和佐剂研究/接种/免疫

★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
dhd997(金币+1):鼓励交流 2010-12-30 09:03:51

PMD-18T的连接效率是很高的，基本都能连上，有可能的你的连接体系不合适，那样也不会长的

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共同学习，共同进步，共同提高，加油！

11楼2010-12-29 21:06:44

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犹寒

铁虫 (初入文坛)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 125.6
帖子: 30
在线: 19.3小时
虫号: 992720
注册: 2010-04-09
专业: 环境微生物学

★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
dhd997(金币+1):鼓励交流 2010-12-30 09:03:59

你的PCR产物是用什么纯化的，是割胶回收还是直接用什么？

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12楼2010-12-29 21:45:32

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Arrennew

铁杆木虫 (正式写手)

MolEPI: 4
应助: 19 (小学生)
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红花: 2
帖子: 301
在线: 122.9小时
虫号: 322853
注册: 2007-03-12
性别: GG
专业: 林木遗传育种学

用别人的平板试试

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生命不息，探索不止。

13楼2010-12-29 22:20:43

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小晓

金虫 (正式写手)

应助: 1 (幼儿园)
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性别: MM
专业: 生物化学

★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
rainwander(金币+2):鼓励积极参与~~~ 2011-01-01 00:57:45

你用什么酶做的PCR?确定末端有A吧？
主要就三个点关键：
1.感受态的效率，这个可以转个质粒看看，计算下效率有多高；
2.载体和片段质量，载体不要反复冻融，要不然末端被破坏了，保证载体浓度；回收的片段检测下浓度，片段浓度低于100ng/ul 肯定不大好
3.载体和片段连接比例，这个参考手册上的吧一般是片段高点效果好

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做最好的自己

14楼2010-12-30 12:37:32

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gongeleven

铁杆木虫 (正式写手)

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性别: GG
专业: 生物物理、生物化学与分子

★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流

楼主所说的阳性对照，是不是转化质粒的？

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15楼2010-12-30 13:07:01

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hfkset

铜虫 (初入文坛)

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注册: 2009-08-26

★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流

克隆很简单的，不要有压力，相信自己

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16楼2010-12-30 13:12:04

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nutplay

新虫 (初入文坛)

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引用回帖:

Originally posted by gongeleven at 2010-12-30 13:07:01:
楼主所说的阳性对照，是不是转化质粒的？

嗯，是质粒来的

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17楼2010-12-30 14:16:54

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nutplay

新虫 (初入文坛)

应助: 0 (幼儿园)
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在线: 6.7小时
虫号: 942044
注册: 2010-01-13

引用回帖:

Originally posted by 犹寒 at 2010-12-29 21:45:32:
你的PCR产物是用什么纯化的，是割胶回收还是直接用什么？

割胶回收试剂盒纯化

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18楼2010-12-30 14:17:44

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nutplay

新虫 (初入文坛)

应助: 0 (幼儿园)
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引用回帖:

Originally posted by 小晓 at 2010-12-30 12:37:32:
你用什么酶做的PCR?确定末端有A吧？
主要就三个点关键：
1.感受态的效率，这个可以转个质粒看看，计算下效率有多高；
2.载体和片段质量，载体不要反复冻融，要不然末端被破坏了，保证载体浓度；回收的片段检测 ...

用taq酶~载体都是在冰上融的，而且换过新的，用了没几次

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19楼2010-12-30 14:19:14

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xiaoee2728

金虫 (小有名气)

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专业: 生物化学

★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流

我觉得可能是试剂盒的问题，换一个新的试试，有时候就是这种最不可能是问题的环节成为问题。

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似水流年

20楼2010-12-30 22:14:35

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