应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】急！克隆快做了一个月了，就是做不出来
52/1返回列表
查看: 3151  |  回复: 24
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

nutplay

新虫 (初入文坛)

[交流] 【求助/交流】急！克隆快做了一个月了，就是做不出来 已有20人参与

TA 克隆
载体：pMD 18-T(Takara)
感受态：DH5a (天根)
实验流程是基本按照分子克隆上说的
PCR产物做了纯化，由于浓度比较低，所以
载体：0.5ul
PCR产物：4.5ul
Solution I: 5ul
14-16°连接过夜
转化用100ul的感受态细胞
热激什么的都没有问题，复苏后浓缩成100ul全部涂板，但是就是不长东西。做了阳性对照，也没长。好奇怪啊，不知道是哪里出了问题。
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
1楼 2010-12-28 13:35:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xiaoee2728

金虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
我觉得可能是试剂盒的问题，换一个新的试试，有时候就是这种最不可能是问题的环节成为问题。
赞一下(1人) 回复此楼
似水流年
20楼2010-12-30 22:14:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 25 个回答

susizheng

木虫 (著名写手)

我們是糖 甜到憂傷
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
amisking(金币+2):鼓励 2010-12-28 19:42:26
先转个空质粒看看感受态是否有问题先。
如果感受态没问题，阳性对照都不长，应该要考虑盒子的问题了。
再就是你的片段多大？超过3K，pMD18-T连起来就有点难度了。

[ Last edited by susizheng on 2010-12-28 at 14:09 ]
赞一下(2人) 回复此楼
Thank-you，so-blue.
2楼2010-12-28 14:08:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

nutplay

新虫 (初入文坛)
片段1700多bp，正常大小，做了阳性对照的，还是没有长，换过好几个感受态了，以前用过人家做过能做出来的感受态也不长，崩溃啊~~~
赞一下 回复此楼
3楼2010-12-28 14:18:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lhwei1987

铁杆木虫 (正式写手)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
rainwander(金币+1):鼓励积极参与~~~ 2011-01-01 00:57:10
连接时间可以加长试试，我上次一个2000的连接20小时才筛出来
赞一下(2人) 回复此楼
4楼2010-12-28 15:26:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 25 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[文学芳草园] 梦想 +4 myrtle 2026-08-26 4/200 2026-08-31 08:43 by 逸域隐帆
[基金申请] 投票:  有多少人是今天查系统知道结果的？ +17 爱看书的可乐 2026-08-26 19/950 2026-08-31 08:28 by xiangy672
[基金申请] 国社科又开始会评了，不知道这次命运如何 +5 雨打竹帘 2026-08-30 9/450 2026-08-30 22:23 by 余韵清
[基金申请] 有没有仍没收到信息的 +7 德尚中行 2026-08-27 8/400 2026-08-30 20:52 by purplejack
[基金申请] 29号明天会评吗 +3 笨笨唐 2026-08-28 3/150 2026-08-30 09:29 by cww8181
[基金申请] 麻烦专家们看看评委们的意见（F口面上） +6 gdd2018 2026-08-28 11/550 2026-08-30 08:58 by 超级无敌华子
[基金申请] 我就是申请一个面上项目而已，这评审意见是按照杰青的条件评的吧？ +6 gouxfjh 2026-08-28 11/550 2026-08-30 07:57 by gouxfjh
[基金申请] 国自然面上复盘~欢迎讨论 (金币+15) +15 晴天加油 2026-08-26 16/800 2026-08-29 18:28 by symmetry
[基金申请] 国自然评审意见 +13 wangmingqi 2026-08-28 19/950 2026-08-29 10:22 by Poppy1104
[基金申请] 2026年叶企孙基金 +4 bud_bud 2026-08-27 7/350 2026-08-29 07:23 by foolishmani
[基金申请] 为什么资助数各大高校都创新高，自己申请怎么就这么难 +12 Kittylucky 2026-08-27 13/650 2026-08-29 00:04 by superceng
[基金申请] 基金系统什么内容也没有 30+4 winsaint 2026-08-27 9/450 2026-08-28 11:06 by maolC
[基金申请] 怎么查啊 +6 huang1991js 2026-08-26 6/300 2026-08-28 08:42 by winsaint
[基金申请] 为什么 国际(地区)合作与交流项目 没有放榜？ 10+3 majunge000 2026-08-26 11/550 2026-08-27 08:42 by 北京莱茵编辑
[基金申请] 2026年8月25日国自然放榜前突然收到列入评审专家邮件，有关系吗？ +25 木水思豆 2026-08-25 28/1400 2026-08-26 14:53 by draco1987
[基金申请] 出来了 +9 trojank 2026-08-26 9/450 2026-08-26 14:25 by 宝贝虫子
[基金申请] 国合里面能看到了 +7 一怀馨秋 2026-08-26 7/350 2026-08-26 11:23 by zhaosm1982
[基金申请] 项目信息和经费信息在系统里都可以看到了 +6 wittyboy 2026-08-26 14/700 2026-08-26 10:55 by wittyboy
[基金申请] 国合现在查不到了吗？ +10 chengyan1220 2026-08-24 20/1000 2026-08-26 08:57 by peasantsprig
[基金申请] 如果此刻你正在为国基感到焦虑，不妨来听听这首《基金之外》 +8 scalable 2026-08-24 8/400 2026-08-25 12:52 by jnhyjjm
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭