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[交流]
【求助/交流】急！克隆快做了一个月了，就是做不出来 已有20人参与
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TA 克隆 载体：pMD 18-T(Takara) 感受态：DH5a (天根) 实验流程是基本按照分子克隆上说的 PCR产物做了纯化，由于浓度比较低，所以 载体：0.5ul PCR产物：4.5ul Solution I: 5ul 14-16°连接过夜 转化用100ul的感受态细胞 热激什么的都没有问题，复苏后浓缩成100ul全部涂板，但是就是不长东西。做了阳性对照，也没长。好奇怪啊，不知道是哪里出了问题。 |
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3楼2010-12-28 14:18:43
susizheng
木虫 (著名写手)
我們是糖 甜到憂傷
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2楼2010-12-28 14:08:49
lhwei1987
铁杆木虫 (正式写手)
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4楼2010-12-28 15:26:09
天使托
专家顾问 (职业作家)
T.Shen
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- 专业: 微生物生理与生物化学
- 管辖: 微生物
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小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
dhd997(金币+3):good 2010-12-29 17:06:49
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
dhd997(金币+3):good 2010-12-29 17:06:49
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建议： 1:重新做感受态细胞，细胞并不是浓度越大越好，我们一般是50-60ul，再转化； 2：重新连接，把连接体系可以稍微变一下，DNA量可以稍微加大一些，一般如果没有连上的话，细胞再好，也不会长的，不知道你的质粒是什么抗性，当然了也可以把抗生素浓度降低一些！ 3：连接时间可以长一些，一般都是过夜连接，记得我上次连接几个基因，连了7，8个小时吧，转化之后涂布就长了几个，可是验证是正确的，后来连接一个基因，连接了15个小时吧，然后涂布，长的很多，挑了几个验证，都是正确的！ |
5楼2010-12-28 15:30:25
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