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nutplay

新虫 (初入文坛)

[交流] 【求助/交流】急!克隆快做了一个月了,就是做不出来 已有20人参与

TA 克隆
载体:pMD 18-T(Takara)
感受态:DH5a (天根)
实验流程是基本按照分子克隆上说的
PCR产物做了纯化,由于浓度比较低,所以
载体:0.5ul
PCR产物:4.5ul
Solution I: 5ul
14-16°连接过夜
转化用100ul的感受态细胞
热激什么的都没有问题,复苏后浓缩成100ul全部涂板,但是就是不长东西。做了阳性对照,也没长。好奇怪啊,不知道是哪里出了问题。
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susizheng

木虫 (著名写手)

我們是糖 甜到憂傷

★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
amisking(金币+2):鼓励 2010-12-28 19:42:26
先转个空质粒看看感受态是否有问题先。
如果感受态没问题,阳性对照都不长,应该要考虑盒子的问题了。
再就是你的片段多大?超过3K,pMD18-T连起来就有点难度了。

[ Last edited by susizheng on 2010-12-28 at 14:09 ]
Thank-you,so-blue.
2楼2010-12-28 14:08:49
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