24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
查看: 2780  |  回复: 24
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

nutplay

新虫 (初入文坛)

[交流] 【求助/交流】急!克隆快做了一个月了,就是做不出来 已有20人参与

TA 克隆
载体:pMD 18-T(Takara)
感受态:DH5a (天根)
实验流程是基本按照分子克隆上说的
PCR产物做了纯化,由于浓度比较低,所以
载体:0.5ul
PCR产物:4.5ul
Solution I: 5ul
14-16°连接过夜
转化用100ul的感受态细胞
热激什么的都没有问题,复苏后浓缩成100ul全部涂板,但是就是不长东西。做了阳性对照,也没长。好奇怪啊,不知道是哪里出了问题。
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

nutplay

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
Originally posted by 犹寒 at 2010-12-29 21:45:32:
你的PCR产物是用什么纯化的,是割胶回收还是直接用什么?

割胶回收试剂盒纯化
18楼2010-12-30 14:17:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 25 个回答

susizheng

木虫 (著名写手)

我們是糖 甜到憂傷

★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
amisking(金币+2):鼓励 2010-12-28 19:42:26
先转个空质粒看看感受态是否有问题先。
如果感受态没问题,阳性对照都不长,应该要考虑盒子的问题了。
再就是你的片段多大?超过3K,pMD18-T连起来就有点难度了。

[ Last edited by susizheng on 2010-12-28 at 14:09 ]
Thank-you,so-blue.
2楼2010-12-28 14:08:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

nutplay

新虫 (初入文坛)

片段1700多bp,正常大小,做了阳性对照的,还是没有长,换过好几个感受态了,以前用过人家做过能做出来的感受态也不长,崩溃啊~~~
3楼2010-12-28 14:18:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lhwei1987

铁杆木虫 (正式写手)

★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
rainwander(金币+1):鼓励积极参与~~~ 2011-01-01 00:57:10
连接时间可以加长试试,我上次一个2000的连接20小时才筛出来
4楼2010-12-28 15:26:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 296求调剂 +5 汪!?! 2026-04-09 5/250 2026-04-09 17:47 by 柠檬不酸zy
[考研] 0860004 求调剂 309分 +6 Yin DY 2026-04-09 6/300 2026-04-09 10:19 by 啊李999
[考研] 0702物理学学硕299求调剂 +5 祁柒连 2026-04-06 5/250 2026-04-09 09:27 by wj165256
[考研] 0703调剂 +17 拾玖壹 2026-04-04 19/950 2026-04-09 09:18 by may_新宇
[考研] 专硕310求调剂 +7 捞捞我…. 2026-04-04 8/400 2026-04-08 20:24 by yutian743
[考研] 266求调剂 +5 08电气工程 2026-04-03 5/250 2026-04-08 20:22 by 逆水乘风
[考研] 一志愿南昌大学,085600,344分求调剂 +11 调剂上岸玘 2026-04-05 12/600 2026-04-08 16:17 by luoyongfeng
[考研] 求材料调剂,一志愿郑州大学289分 +21 硕星赴 2026-04-03 21/1050 2026-04-08 11:55 by 猪会飞
[考研] 307求调剂 +14 超级伊昂大王 2026-04-06 14/700 2026-04-08 07:03 by 无际的草原
[考研] 388求调剂 +6 四川王涛 2026-04-07 8/400 2026-04-08 00:17 by JourneyLucky
[考研] 一志愿西南090202求调剂 +4 在线求有学上 2026-04-07 4/200 2026-04-07 19:47 by biomichael
[考研] 081700化学工程与技术 一志愿中海洋 323 求调剂学校 +19 披星河 2026-04-03 19/950 2026-04-07 15:14 by 尽舜尧1
[考研] 085404 293求调剂 +8 勇远库爱314 2026-04-06 9/450 2026-04-07 13:05 by flydream1314
[考研] 22408 331分求调剂 +4 y__1 2026-04-06 4/200 2026-04-06 17:26 by 土木硕士招生
[考研] 285求调剂 +5 mapmath 2026-04-06 6/300 2026-04-06 17:18 by 蓝云思雨
[考研] 085405软件工程301分求调剂,专硕可跨专业,四六级已过 +3 静静想想 2026-04-05 3/150 2026-04-06 15:23 by nepu_uu
[考研] 化学357分,考研调剂 +11 .Starry. 2026-04-04 12/600 2026-04-06 06:28 by houyaoxu
[考研] 308求调剂 +4 maverick^_^ 2026-04-03 4/200 2026-04-05 19:08 by 蓝云思雨
[考研] 301求调剂 +3 XYPLR 2026-04-05 4/200 2026-04-05 19:07 by XYPLR
[考研] 考研调剂 +3 Draa 2026-04-03 3/150 2026-04-03 17:37 by hgwz7468
信息提示
请填处理意见