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mengxibio

新虫 (小有名气)

[交流] 做克隆出了很诡异的问题 已有9人参与

在做克隆,向感受态细胞导入载体出问题了。
向感受态细胞导入载体(上有抗amp位点,以及蓝白斑的位点)
结果,negative(纯的感受态细胞,没有导入载体)上出现大量蓝斑,而且其他几板普遍出现大量蓝斑,白斑几乎没有
之后我做菌落pcr,证明包括negative和其他几板上的蓝斑菌的确没有导入载体

问题是什么,操作上绝没有问题,我和另外一个人先后做了两遍,同样的结果

现在就怀疑是感受态细胞的问题,是一个师兄自己做的。但是这样的感受态细胞也太可怕了吧,不包括载体(已经用引物,做pcr证明),但是却含有抗amp基因,含有蓝白斑所需的基因

大家认为什么原因呢,排除操作上的原因
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mengxibio

新虫 (小有名气)

引用回帖:
5楼: Originally posted by anlewo7777 at 2011-08-09 14:06:41:
感受态细菌菌株应该是半乳糖苷酶缺陷型菌株,因为导入的质粒引入了菌体缺失的一条半乳糖苷酶肽段,和菌株有的一个肽段互补而有半乳糖苷酶活性,从而降解X-gal产生蓝色。你要是想查原因,可以看你的感受态菌株的说 ...

蓝白斑原理我懂的。用的感受态是一个师兄自己做的。我们实验室是这样,做感受态时做一大批,实验室共用
7楼2011-08-09 16:40:06
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空谷幽风

金虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
从其他公司买几支感受态试试
a?,c??ae~?a,EURc§?c?μé-,cs,,a‘?é?“i1/4?i1/4?i1/4?i1/4?
2楼2011-08-09 12:26:33
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mengxibio

新虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 空谷幽风 at 2011-08-09 12:26:33:
从其他公司买几支感受态试试

已经订了生工的成品,然后做下看看,估计就是感受态的问题
3楼2011-08-09 12:57:46
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wzqno

金虫 (小有名气)

★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
西瓜(金币+1): 有可能 2011-08-10 17:58:38
是不是板子的amp失效了,再说了可以自己做感受态细菌啊,没啥难度啊
4楼2011-08-09 13:49:47
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