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zqt123_1981木虫 (小有名气)
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阳性克隆的鉴定问题 已有6人参与
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各位如图1蓝白斑筛选白斑菌落PCR很正确，然后摇菌提取质粒，图2前10个孔质粒PCR，后十个孔质粒酶切。图三 前十个孔质粒酶切后十个孔是质粒 为啥PCR有目的条带，酶切却没有啊       [ Last edited by zqt123_1981 on 2011-6-2 at 19:45 ] |
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 【分子生物】EPI帖 |
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小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
1949stone(EPI+1): 来也 2011-06-02 14:54:17
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
1949stone(EPI+1): 来也 2011-06-02 14:54:17
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PCR验证是初步筛选，就是看你的目的基因是否已经连接到载体上了；包括用划到平板上的菌当模板进行PCR，或者用摇的菌液直接当模板进行PCR，如果能够扩增出目的片段，就说明你很有可能是连接正确了； 其次确定了这个菌有可能对的话，那么直接提质粒，酶切验证，至于楼主说的载体没用过，但是你连接之前用什么酶切的，现在重组质粒依然用什么酶进行切，我有点诧异，楼主难道不知道吗？ 酶切完之后，点样，对照就是你当初酶切的基因，酶切的载体，然后就是你现在酶切的重组载体，如果大小正确，那么就OK了。。。继续下游工作吧！ |
7楼2011-06-02 14:50:10
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