24小时热门版块排行榜    

CyRhmU.jpeg
查看: 3129  |  回复: 6
本帖产生 1 个 MolEPI ,点击这里进行查看
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

zqt123_1981

木虫 (小有名气)

[交流] 阳性克隆的鉴定问题已有6人参与

各位如图1蓝白斑筛选白斑菌落PCR很正确,然后摇菌提取质粒,图2前10个孔质粒PCR,后十个孔质粒酶切。图三 前十个孔质粒酶切后十个孔是质粒
为啥PCR有目的条带,酶切却没有啊






[ Last edited by zqt123_1981 on 2011-6-2 at 19:45 ]
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yabxxh

木虫 (正式写手)

★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
dhd997(金币+2): good 2011-06-02 18:48:52
本人现在已经放弃PCR鉴定了,直接摇菌,提取质粒,双酶切鉴定。
什么蓝白斑,PCR鉴定都是浮云,呵呵。
因为我用的聚合酶太贵了,相比之下,酶切要快速、省事和经济得多。
鉴于你的载体,建议用salI和NocI来双酶切,当然也可以用你片段两端的酶切位点来切
6楼2011-06-02 09:44:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 7 个回答

空谷幽风

金虫 (正式写手)

★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
dhd997(金币+3): good 2011-06-02 09:05:49
引用回帖:
Originally posted by zqt123_1981 at 2011-06-01 21:20:19:
各位我有一段未知片段要去测序,在蓝白斑筛选的时候白斑用菌落PCR鉴定结果正确,然后挑菌进行摇菌培养,我看有的说菌液也可以PCR,菌液提取质粒也可以PCR,还有就是质粒酶切。这三个哪个更准确一点,如果酶切的 ...

PCR的话,用菌落、菌液或者质粒来做都可以,但是用菌落和菌液来鉴定是最快速的方法,一般如果pcr的方法鉴定不出来的话就采用酶切来验证,酶切位点的选择只要在克隆位点的的上下游随便选两个就可以了,当然考虑到成本,越常用的酶越好。
a?,c??ae~?a,EURc§?c?μé-,cs,,a‘?é?“i1/4?i1/4?i1/4?i1/4?
2楼2011-06-01 22:12:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhangby2002

银虫 (小有名气)

★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
dhd997(金币+3): good 2011-06-02 09:06:13
引用回帖:
Originally posted by zqt123_1981 at 2011-06-01 21:20:19:
各位我有一段未知片段要去测序,在蓝白斑筛选的时候白斑用菌落PCR鉴定结果正确,然后挑菌进行摇菌培养,我看有的说菌液也可以PCR,菌液提取质粒也可以PCR,还有就是质粒酶切。这三个哪个更准确一点,如果酶切的 ...

菌落PCR,质粒PCR,双酶切鉴定我都做过,这三种都是鉴定阳性克隆的。根据自己实验室的情况来定吧,双酶切鉴定成本很高,看你用的载体来定吧,有的载体图上没双酶切位点,根据载体上的protol来定吧
业精于勤,荒于嬉;行成于思,毁于随。
3楼2011-06-01 22:30:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

d1emon

铜虫 (初入文坛)

★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
dhd997(金币+2): good 2011-06-02 09:06:23
酶切最准确,在用菌液pcr的基础上再进行双酶切,结果可信度最高
4楼2011-06-02 06:09:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通表情 高级回复(可上传附件)
信息提示
请填处理意见