应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 阳性克隆的鉴定问题
51/1返回列表
查看: 3606  |  回复: 6
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
本帖产生 1 个 MolEPI ，点击这里进行查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

zqt123_1981

木虫 (小有名气)

[交流] 阳性克隆的鉴定问题 已有6人参与

各位如图1蓝白斑筛选白斑菌落PCR很正确，然后摇菌提取质粒，图2前10个孔质粒PCR，后十个孔质粒酶切。图三 前十个孔质粒酶切后十个孔是质粒
为啥PCR有目的条带，酶切却没有啊






[ Last edited by zqt123_1981 on 2011-6-2 at 19:45 ]
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

【分子生物】EPI帖

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2011-06-01 21:20:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yabxxh

木虫 (正式写手)
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
dhd997(金币+2): good 2011-06-02 18:48:52
本人现在已经放弃PCR鉴定了，直接摇菌，提取质粒，双酶切鉴定。
什么蓝白斑，PCR鉴定都是浮云，呵呵。
因为我用的聚合酶太贵了，相比之下，酶切要快速、省事和经济得多。
鉴于你的载体，建议用salI和NocI来双酶切，当然也可以用你片段两端的酶切位点来切
赞一下(3人) 回复此楼
6楼2011-06-02 09:44:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 7 个回答

空谷幽风

金虫 (正式写手)
★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
dhd997(金币+3): good 2011-06-02 09:05:49
引用回帖:
Originally posted by zqt123_1981 at 2011-06-01 21:20:19:
各位我有一段未知片段要去测序，在蓝白斑筛选的时候白斑用菌落PCR鉴定结果正确，然后挑菌进行摇菌培养，我看有的说菌液也可以PCR，菌液提取质粒也可以PCR，还有就是质粒酶切。这三个哪个更准确一点，如果酶切的 ...

PCR的话，用菌落、菌液或者质粒来做都可以，但是用菌落和菌液来鉴定是最快速的方法，一般如果pcr的方法鉴定不出来的话就采用酶切来验证，酶切位点的选择只要在克隆位点的的上下游随便选两个就可以了，当然考虑到成本，越常用的酶越好。
赞一下(2人) 回复此楼
a?,c??ae~?a,EURc§?c?μé-,cs,,a‘?é?“i1/4?i1/4?i1/4?i1/4?
2楼2011-06-01 22:12:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhangby2002

银虫 (小有名气)
★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
dhd997(金币+3): good 2011-06-02 09:06:13
引用回帖:
Originally posted by zqt123_1981 at 2011-06-01 21:20:19:
各位我有一段未知片段要去测序，在蓝白斑筛选的时候白斑用菌落PCR鉴定结果正确，然后挑菌进行摇菌培养，我看有的说菌液也可以PCR，菌液提取质粒也可以PCR，还有就是质粒酶切。这三个哪个更准确一点，如果酶切的 ...

菌落PCR,质粒PCR,双酶切鉴定我都做过，这三种都是鉴定阳性克隆的。根据自己实验室的情况来定吧，双酶切鉴定成本很高，看你用的载体来定吧，有的载体图上没双酶切位点，根据载体上的protol来定吧
赞一下(2人) 回复此楼
业精于勤，荒于嬉；行成于思，毁于随。
3楼2011-06-01 22:30:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

d1emon

铜虫 (初入文坛)
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
dhd997(金币+2): good 2011-06-02 09:06:23
酶切最准确，在用菌液pcr的基础上再进行双酶切，结果可信度最高
赞一下(2人) 回复此楼
4楼2011-06-02 06:09:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 7 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[文学芳草园] 梦想 +5 myrtle 2026-08-26 7/350 2026-09-01 15:18 by myrtle
[基金申请] 学科评审组评审是指会评吗？ +4 瞬息宇宙 2026-08-31 4/200 2026-09-01 14:58 by jiaoxg
[基金申请] 面上函评意见出来了，像什么等级？ 20+4 Tsingking1 2026-08-27 15/750 2026-09-01 12:23 by icm639
[论文投稿] 小白求助 投论文要求的highlights应该如何写 5+3 l1963982152 2026-08-29 4/200 2026-09-01 09:04 by 北京莱茵编辑
[基金申请] 麻烦专家们看看评委们的意见（F口面上） +7 gdd2018 2026-08-28 12/600 2026-09-01 08:32 by 尼古拉斯小虫
[基金申请] 投票:  有多少人是今天查系统知道结果的？ +17 爱看书的可乐 2026-08-26 19/950 2026-08-31 21:30 by xiangy672
[基金申请] 基金未中，这种答复是模板吗？ +6 zhaosm1982 2026-08-27 7/350 2026-08-31 21:18 by qdxxmc
[基金申请] 面上意见出来了 +12 黄鸟于飞Chao 2026-08-29 23/1150 2026-08-31 18:57 by 黄鸟于飞Chao
[基金申请] 能否申诉？ +7 echo8914667 2026-08-30 8/400 2026-08-31 17:00 by yihongxu
[基金申请] 基金不中，共勉 +12 eulota 2026-08-26 12/600 2026-08-31 08:42 by ZJTJZ
[基金申请] 为什么到现在没收到通知？ +5 tannykie 2026-08-29 5/250 2026-08-30 21:05 by purplejack
[基金申请] 国自然面上复盘~欢迎讨论 (金币+15) +15 晴天加油 2026-08-26 16/800 2026-08-29 18:28 by symmetry
[基金申请] 国自然评审意见 +13 wangmingqi 2026-08-28 19/950 2026-08-29 10:22 by Poppy1104
[基金申请] 2026年叶企孙基金 +4 bud_bud 2026-08-27 7/350 2026-08-29 07:23 by foolishmani
[基金申请] 看板上这么多中的，有点像50人群里49个人都是骗子的那种感觉…… +5 a089 2026-08-26 6/300 2026-08-27 14:05 by jonewore
[基金申请] 为什么 国际(地区)合作与交流项目 没有放榜？ 10+3 majunge000 2026-08-26 11/550 2026-08-27 08:42 by 北京莱茵编辑
[基金申请] 我不理解！ +15 Edward_pc 2026-08-26 23/1150 2026-08-26 20:34 by zzuzxg
[基金申请] 2026年8月25日国自然放榜前突然收到列入评审专家邮件，有关系吗？ +25 木水思豆 2026-08-25 28/1400 2026-08-26 14:53 by draco1987
[基金申请] 为什么国自然不能直接公布 +4 bjdxyxy 2026-08-26 4/200 2026-08-26 13:12 by qingmu1201
[基金申请] 国合里面能看到了 +7 一怀馨秋 2026-08-26 7/350 2026-08-26 11:23 by zhaosm1982
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭