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小丁山

铜虫 (小有名气)

[交流] 鉴定阳性克隆 已有5人参与

pcr做阳性克隆的鉴定,发现p出来的条带比目的条带要大很多,目的条带1k,p出来条带有1.8k,求原因
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lxj341401

至尊木虫 (著名写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
那肯定不对了,非特异性扩增。
2楼2011-06-20 13:46:04
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小丁山

铜虫 (小有名气)

之前我双酶切已经鉴定过 测序也鉴定过 片段是没有问题的
3楼2011-06-20 14:07:37
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475502411

铜虫 (著名写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
你检查一下看质粒上是不是也有跟你引物接合的位置,祝你好运!
可以朝九晚五,也能浪迹天涯
4楼2011-06-20 14:08:13
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小丁山

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by 475502411 at 2011-06-20 14:08:13:
你检查一下看质粒上是不是也有跟你引物接合的位置,祝你好运!

是通用测序引物p的 应该能结合
5楼2011-06-20 14:25:02
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天使托

专家顾问 (职业作家)

T.Shen

★ ★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
西瓜(金币+4, EPI+1): Good! 2011-06-20 16:21:37
1:很有可能是非特异性条带,要么就是菌不纯导致的
2:如果你想继续往下做,那么去提取菌的质粒,首先看看能不能提取出来,提出来之后做一个酶切看看,看看跟你当初酶切的质粒和基因大小一致不?根据我的经验,应该不对,所以最好再重新连接转化吧。。。
3:重新进行连接转化,连接体系可以稍微变一下。。。
Whenever,Wherever,Anyway!MustRemember:Fight!KeepFighting!NeverGiveUp!
6楼2011-06-20 15:20:04
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混在冷泉港

新虫 (初入文坛)

★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
西瓜(金币+2): 是个办法 2011-06-27 16:57:51
把质粒提取出来,测序
7楼2011-06-26 00:08:18
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jiying198509

新虫 (初入文坛)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
应该不对 建议重新PCR 重新纯化 连接
8楼2011-12-02 15:10:49
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