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asdfghjkl-00

新虫 (初入文坛)

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[求助] 克隆假阳性的问题

最近一直在做克隆，蓝白筛选长的白斑也不少，送去测序也有系列，但是一比对，就是载体序列，请问这是怎么回事啊？是阳性率太低了吗？是不是连接效率太低导致的阳性率也低？怎么提高连接效率啊？各位高手们帮忙解决一下吧。。。。

[ Last edited by asdfghjkl-00 on 2011-7-31 at 10:10 ]

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1楼 2011-07-31 10:05:51

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healerly

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【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
dhd997(金币+5, MolEPI+1): 非常热心，破格奖励 2011-07-31 17:51:27

既然有蓝白色菌斑，说明可以转进质粒去。测序不成功，结果是空载体说明是假阳性。楼主是不是用的试剂盒？现在试剂盒载体自连的概率是很小的。
问题1：楼主不进行白色菌斑的PCR鉴定以及双酶切鉴定吗？
问题2：楼主的目的片段是多少？连接多少时间？
建议：1，在测序之前进行阳性菌株的鉴定。
2，如果是长片段的话，建议连接过夜，可以提高连接效率。
希望楼主尽快找到问题~~实验顺利