| 查看: 3407 | 回复: 6 | ||
[求助]
T载体连接目的片段后做蓝白斑全都是假阳性
|
|
我最近在做T载体，实验中发现连接目的片段转化DH5a后，在蓝白斑的板上出现的都是白斑，鉴定后全部是假阳性 实验已确定的是： 1 T载体构建的过程没有问题，因为刚构建好的时候连接目的片段试用后效率还是挺高的； 2 X-gal 应该没有问题，最近也有其他人用同一批IPTG X-gal，平板上也有蓝斑； 3 连接的目的片段是PCR产物，所用Taq酶不是高保真的，就是说末端是加了A的； 4 T载体和PCR产物都是切胶回收的 本人自己分析的原因有可能是T载体的T末端碱基丢失了，但是该末端是酶切后产生的，感觉不应该那么容易掉 还请高人帮忙分析一下原因，还有如果是我分析的原因该怎么避免 |
回复此楼» 猜你喜欢
Wnt-C59：PORCN靶向化学探针，Wnt信号通路阻断机制与科研应用全解析
已经有0人回复
-
Fexaramine：肠道限制性FXR化学探针，结构特征与信号通路研究全解析
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有285人回复
-
NVS-STG2：靶向STING跨膜域的分子胶类激动剂，结构特征与寡聚化机制研究全解析
已经有0人回复
-
DOTA-GPC3肽（CAS 3066439-94-6）：双功能分子探针前体的结构特征与标记应用解析
已经有0人回复
-
科研用 TLR7/8 双激动剂怎么选？现货与质控要点
已经有0人回复
-
SEL120-34A HCl：CDK8/CDK19高选择性激酶抑制剂
已经有0人回复
-
氢氧化钾活化操作
已经有18人回复
-
散金
已经有68人回复
-
生物质超级电容器
已经有0人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 表达载体和目的片段链接问题
已经有7人回复
- 平末端加A尾连接T载体的问题
已经有14人回复
- 有关T载体以及蓝白筛选的3个问题
已经有9人回复
- 最近实验室T载体连接一直都假阳性
已经有11人回复
- T载体连接不上去
已经有26人回复
- 基因敲除的假阳性问题
已经有15人回复
- 片段总是连不到T载体上
已经有22人回复
- T载体克隆做不出来，求帮助
已经有24人回复
- 2.7Kb的片段连接问题
已经有6人回复
- PCR产物末端加A，Taq酶的选择
已经有3人回复
- pGM-T载体连接条件
已经有8人回复
- 目的片段与载体连接后无法检测出
已经有7人回复
- 关于连接转化载体和片段的问题
已经有6人回复
- T载体连接问题
已经有3人回复
- PBS-T载体连接
已经有4人回复
- 回收片段连接以后为什么变短了？在线等
已经有6人回复
- 【求助/交流】pGEM-T Easy载体 T-A 连接 为啥没连入PCR产物的 菌斑是蓝斑
已经有23人回复
- 【求助/交流】蓝白斑假阳性的困惑
已经有3人回复
- 【求助/交流】假阳性是什么原因造成的？
已经有7人回复
- 【求助/交流】洋葱瞬时表达 假阳性
已经有6人回复
yuxia82012
木虫 (著名写手)
- MolEPI: 3
- 应助: 20 (小学生)
- 金币: 4980
- 散金: 2225
- 红花: 2
- 帖子: 1340
- 在线: 426.5小时
- 虫号: 781881
- 注册: 2009-05-29
- 性别: GG
- 专业: 有机合成
2楼2011-10-10 11:38:01
3楼2011-10-10 14:12:57
yuxia82012
木虫 (著名写手)
- MolEPI: 3
- 应助: 20 (小学生)
- 金币: 4980
- 散金: 2225
- 红花: 2
- 帖子: 1340
- 在线: 426.5小时
- 虫号: 781881
- 注册: 2009-05-29
- 性别: GG
- 专业: 有机合成
4楼2011-10-10 14:14:56
5楼2011-10-10 17:50:25
6楼2011-10-11 10:24:35
doublehelix
木虫 (著名写手)
- MolEPI: 3
- 应助: 16 (小学生)
- 金币: 4035.7
- 散金: 666
- 红花: 6
- 帖子: 1201
- 在线: 167小时
- 虫号: 79445
- 注册: 2005-07-10
- 专业: 生物大分子结构与功能
7楼2011-10-11 11:22:38
20