应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » T载体连接目的片段后做蓝白斑全都是假阳性
51/1返回列表
查看: 3476  |  回复: 6
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

漫迹

金虫 (小有名气)

[求助] T载体连接目的片段后做蓝白斑全都是假阳性

我最近在做T载体，实验中发现连接目的片段转化DH5a后，在蓝白斑的板上出现的都是白斑，鉴定后全部是假阳性
    实验已确定的是：
    1 T载体构建的过程没有问题，因为刚构建好的时候连接目的片段试用后效率还是挺高的；
    2 X-gal 应该没有问题，最近也有其他人用同一批IPTG X-gal，平板上也有蓝斑；
   3 连接的目的片段是PCR产物，所用Taq酶不是高保真的，就是说末端是加了A的；
   4 T载体和PCR产物都是切胶回收的

    本人自己分析的原因有可能是T载体的T末端碱基丢失了，但是该末端是酶切后产生的，感觉不应该那么容易掉
    还请高人帮忙分析一下原因，还有如果是我分析的原因该怎么避免
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2011-10-10 11:13:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

另一个天堂

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

我以前的毕业论文是做T载体制备。除了你分析我原因外，我觉得还有可能是某段基因序列发生突变。
     仅仅是个人观点
赞一下 回复此楼
6楼2011-10-11 10:24:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 7 个回答

yuxia82012

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

T载体需要切胶回收吗？不是直接用的吗？
赞一下 回复此楼
在等待中涅槃重生
2楼2011-10-10 11:38:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

漫迹

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by yuxia82012 at 2011-10-10 11:38:01:
T载体需要切胶回收吗？不是直接用的吗？

我是研发T载体的 酶切后制备商用T载体
赞一下 回复此楼
3楼2011-10-10 14:12:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yuxia82012

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by 漫迹 at 2011-10-10 14:12:57:
我是研发T载体的 酶切后制备商用T载体

这个不是太懂，意思你研究的目的就是制备T载体？不是为了克隆基因？
赞一下 回复此楼
在等待中涅槃重生
4楼2011-10-10 14:14:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 7 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭