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lushuiw

银虫 (正式写手)

[求助] T载体克隆做不出来,求帮助

各位战友们,lz在做目的基因与T载体连接,之后转化到DH5α感受态,然后涂板,结果长的特别密,挑到液体培养基摇菌,都是澄清的。大家谁知道是怎么回事呀,做了好长时间了。
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wangqi1107

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
lushuiw(myprayer代发): 金币+1, 赠人玫瑰手有余香,感谢你的慷慨解囊,期待你的精彩。 2013-05-19 10:21:46
lushuiw: 金币+2 2013-05-19 14:10:04
amisking: 回帖置顶 2013-05-19 19:55:17
lushuiw: 金币+3 2013-05-20 21:51:55
第一做阴性对照,看是否你的抗生素是否污染了;第二,检测你的感受态细胞不转化连接产物,直接涂板,看是否污染了。第三,放一个空板,看是否倒的培养基有污染。第四,同时做一个阳性对照。再做一个连接产物转化感受态。这五个板要同时做。然后看看结果,一定能检测出来哪里出了问题。
3楼2013-05-19 09:44:55
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普通回帖

wxf8470

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
lushuiw: 金币+2 2013-05-19 14:08:40
lushuiw: 金币+5 2013-05-20 21:52:01
从你的描述,很像是你的平板抗生素失效了。
2楼2013-05-19 08:45:36
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sunnyboylg

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
lushuiw: 金币+2 2013-05-19 14:10:19
gyesang: 金币+1, 鼓励回帖应助! 2013-05-19 18:19:12
lushuiw: 金币+2 2013-05-20 21:52:07
1、感受态转化涂板前可在培养皿加点IPTG和x-gal用来挑转化子(蓝色的为没转化进的,白色的是转化了的);2、用空质粒转化做个对照
要么读书,要么旅行,身体和灵魂,必须有一个在路上
4楼2013-05-19 11:04:32
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静安jingan

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
lushuiw: 金币+2 2013-05-19 14:11:56
gyesang: 金币+1, 鼓励回帖应助! 2013-05-19 18:19:23
lushuiw: 金币+3 2013-05-20 21:52:13
长的密集应该是氨苄失效了吧,你的液体培养基中也加了氨苄么?液体中不长有可能是温度不适宜,上次摇了一夜都没长,最后才发现20度
让复杂的事情变简单,简单的事情更简单
5楼2013-05-19 13:01:30
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lushuiw

银虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by wxf8470 at 2013-05-19 08:45:36
从你的描述,很像是你的平板抗生素失效了。

我觉得也是,又换了抗生素,果然长的少了,可是挑出来,摇了4个多小时,还是澄清的
6楼2013-05-19 14:09:53
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lushuiw

银虫 (正式写手)

引用回帖:
3楼: Originally posted by wangqi1107 at 2013-05-19 09:44:55
第一做阴性对照,看是否你的抗生素是否污染了;第二,检测你的感受态细胞不转化连接产物,直接涂板,看是否污染了。第三,放一个空板,看是否倒的培养基有污染。第四,同时做一个阳性对照。再做一个连接产物转化感受 ...

我试试
7楼2013-05-19 14:10:10
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lushuiw

银虫 (正式写手)

引用回帖:
4楼: Originally posted by sunnyboylg at 2013-05-19 11:04:32
1、感受态转化涂板前可在培养皿加点IPTG和x-gal用来挑转化子(蓝色的为没转化进的,白色的是转化了的);2、用空质粒转化做个对照

嗯,换个抗生素,顺便做个蓝白斑,再加个对照试试
8楼2013-05-19 14:11:47
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lushuiw

银虫 (正式写手)

引用回帖:
5楼: Originally posted by 静安jingan at 2013-05-19 13:01:30
长的密集应该是氨苄失效了吧,你的液体培养基中也加了氨苄么?液体中不长有可能是温度不适宜,上次摇了一夜都没长,最后才发现20度

我觉得也是抗生素失效了,温度没问题,换个新的氨苄试试
9楼2013-05-19 14:12:40
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静安jingan

铁杆木虫 (职业作家)

引用回帖:
9楼: Originally posted by lushuiw at 2013-05-19 14:12:40
我觉得也是抗生素失效了,温度没问题,换个新的氨苄试试...

摇菌的时候不是用不加氨苄的么,转速、温度都控制好可以长起来,只是有时候需要时间很久
让复杂的事情变简单,简单的事情更简单
10楼2013-05-19 14:19:59
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