【答案】应助回帖

11楼2013-05-19 19:40:25

游蓝达you

新虫 (初入文坛)

应助: 1 (幼儿园)
金币: 13.2
帖子: 19
在线: 13.8小时
虫号: 1454946
注册: 2011-10-22
性别: MM
专业: 生物化学

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
lushuiw: 金币+2 2013-05-20 08:03:26
lushuiw: 金币+2 2013-05-20 21:52:30

菌斑长的密而不大应该是涂多了吧，少涂点试试。菌液我们都180r，过夜摇的啊。

瓶子在试验。。。

12楼2013-05-19 22:21:55

lushuiw

银虫 (正式写手)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 3262.2
红花: 2
帖子: 435
在线: 113.9小时
虫号: 1456900
注册: 2011-10-23
专业: 生物大分子结构与功能

引用回帖:

12楼: Originally posted by 游蓝达you at 2013-05-19 22:21:55
菌斑长的密而不大应该是涂多了吧，少涂点试试。菌液我们都180r，过夜摇的啊。

有一部分原因是amp失效了，所以都长了

13楼2013-05-20 08:04:04

xjtu0025

新虫 (小有名气)

应助: 7 (幼儿园)
金币: 38.8
散金: 7
红花: 1
帖子: 113
在线: 39.1小时
虫号: 1747244
注册: 2012-04-10
专业: 基因组学

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
lushuiw: 金币+2 2013-05-20 10:33:33
lushuiw(gyesang代发): 金币+1, 鼓励回帖应助！ 2013-05-20 16:28:06
lushuiw: 金币+3 2013-05-20 21:52:38

童鞋,要做阴性对照呀....必要时要做阳性对照...TAKARA自己都有阳性对照阳性对照..T载体不能自连的吧...

14楼2013-05-20 08:48:38

lushuiw

银虫 (正式写手)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 3262.2
红花: 2
帖子: 435
在线: 113.9小时
虫号: 1456900
注册: 2011-10-23
专业: 生物大分子结构与功能

引用回帖:

14楼: Originally posted by xjtu0025 at 2013-05-20 08:48:38
童鞋,要做阴性对照呀....必要时要做阳性对照...TAKARA自己都有阳性对照阳性对照..T载体不能自连的吧...

知道了，下次一定注意

15楼2013-05-20 10:33:55

visittings

新虫 (初入文坛)

应助: 1 (幼儿园)
金币: 15.6
帖子: 1
在线: 32分钟
虫号: 660929
注册: 2008-11-24
专业: 生物大分子结构与功能

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
lushuiw(gyesang代发): 金币+1, 鼓励回帖应助！ 2013-05-20 16:28:25
lushuiw: 金币+2 2013-05-20 21:14:04
lushuiw: 金币+4 2013-05-20 21:52:45

也有可能是染噬菌体了，你可以把DH5a单独培养一下，看是不是能够长起来，如果也不长，说明感受态有问题。以前我也出现过DH5a会养死，下面有絮状的菌体，应该不是楼主形容的澄清。
另外一个就是抗性的问题了。楼主没有做PCR鉴定吗？直接菌落PCR，看看有没有成功转入连接产物，可能根本没阳性，都是假阳性，自然养不活了，这很常见。

16楼2013-05-20 12:39:33

堍仔

至尊木虫 (文坛精英)

应助: 21 (小学生)
贵宾: 1.041
金币: 14115.7
散金: 11786
红花: 336
沙发: 82
帖子: 16139
在线: 645小时
虫号: 1453072
注册: 2011-10-20
性别: MM
专业: 动物资源与保护

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
lushuiw(gyesang代发): 金币+1, 鼓励回帖应助！ 2013-05-20 16:28:35
lushuiw: 金币+2 2013-05-20 21:15:45
lushuiw: 金币+4 2013-05-20 21:52:52

如果是菌像卫星菌落就很可能是氨苄的问题，但是照理说摇菌也要摇出来啊，是不是你摇菌那步出问题了啊，对了，你是蓝白斑挑选吗？还是直接挑？如果是蓝白斑的话可以把板子放冰箱时间长点，个人建议用温度计测下摇床的温度

17楼2013-05-20 13:33:45

lushuiw

银虫 (正式写手)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 3262.2
红花: 2
帖子: 435
在线: 113.9小时
虫号: 1456900
注册: 2011-10-23
专业: 生物大分子结构与功能

引用回帖:

16楼: Originally posted by visittings at 2013-05-20 12:39:33
也有可能是染噬菌体了，你可以把DH5a单独培养一下，看是不是能够长起来，如果也不长，说明感受态有问题。以前我也出现过DH5a会养死，下面有絮状的菌体，应该不是楼主形容的澄清。
另外一个就是抗性的问题了。楼主没 ...

结果是因为氨苄快要失效了，加到固体培养基，可能温度偏高，就完全失效了，加到液体培养基里的还有点效果，于是就摇不出来了

18楼2013-05-20 21:15:33

lushuiw

银虫 (正式写手)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 3262.2
红花: 2
帖子: 435
在线: 113.9小时
虫号: 1456900
注册: 2011-10-23
专业: 生物大分子结构与功能

引用回帖:

17楼: Originally posted by 堍仔 at 2013-05-20 13:33:45
如果是菌像卫星菌落就很可能是氨苄的问题，但是照理说摇菌也要摇出来啊，是不是你摇菌那步出问题了啊，对了，你是蓝白斑挑选吗？还是直接挑？如果是蓝白斑的话可以把板子放冰箱时间长点，个人建议用温度计测下摇床的 ...

最终证实是氨苄的问题，谢谢啦

19楼2013-05-20 21:16:21

堍仔

至尊木虫 (文坛精英)

应助: 21 (小学生)
贵宾: 1.041
金币: 14115.7
散金: 11786
红花: 336
沙发: 82
帖子: 16139
在线: 645小时
虫号: 1453072
注册: 2011-10-20
性别: MM
专业: 动物资源与保护

引用回帖:

19楼: Originally posted by lushuiw at 2013-05-20 21:16:21
最终证实是氨苄的问题，谢谢啦...

哦，没事啦，我们去年也是因为氨苄的原因，做克隆就是这样啦，影响因素太多

20楼2013-05-20 21:17:20