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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » T载体克隆做不出来，求帮助
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lushuiw

银虫 (正式写手)
引用回帖:
10楼: Originally posted by 静安jingan at 2013-05-19 14:19:59
摇菌的时候不是用不加氨苄的么，转速、温度都控制好可以长起来，只是有时候需要时间很久...

摇菌复苏时没加氨苄，平板上加了，然后挑菌培养的液体培养基也加了。
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11楼2013-05-19 19:40:25
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游蓝达you

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
lushuiw: 金币+2 2013-05-20 08:03:26
lushuiw: 金币+2 2013-05-20 21:52:30
菌斑长的密而不大应该是涂多了吧，少涂点试试。菌液我们都180r，过夜摇的啊。
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瓶子在试验。。。
12楼2013-05-19 22:21:55
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lushuiw

银虫 (正式写手)
引用回帖:
12楼: Originally posted by 游蓝达you at 2013-05-19 22:21:55
菌斑长的密而不大应该是涂多了吧，少涂点试试。菌液我们都180r，过夜摇的啊。

有一部分原因是amp失效了，所以都长了
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13楼2013-05-20 08:04:04
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xjtu0025

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
lushuiw: 金币+2 2013-05-20 10:33:33
lushuiw(gyesang代发): 金币+1, 鼓励回帖应助！ 2013-05-20 16:28:06
lushuiw: 金币+3 2013-05-20 21:52:38
童鞋,要做阴性对照呀....必要时要做阳性对照...TAKARA自己都有阳性对照阳性对照..T载体不能自连的吧...
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14楼2013-05-20 08:48:38
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lushuiw

银虫 (正式写手)
引用回帖:
14楼: Originally posted by xjtu0025 at 2013-05-20 08:48:38
童鞋,要做阴性对照呀....必要时要做阳性对照...TAKARA自己都有阳性对照阳性对照..T载体不能自连的吧...

知道了，下次一定注意
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15楼2013-05-20 10:33:55
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visittings

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
lushuiw(gyesang代发): 金币+1, 鼓励回帖应助！ 2013-05-20 16:28:25
lushuiw: 金币+2 2013-05-20 21:14:04
lushuiw: 金币+4 2013-05-20 21:52:45
也有可能是染噬菌体了，你可以把DH5a单独培养一下，看是不是能够长起来，如果也不长，说明感受态有问题。以前我也出现过DH5a会养死，下面有絮状的菌体，应该不是楼主形容的澄清。
另外一个就是抗性的问题了。楼主没有做PCR鉴定吗？直接菌落PCR，看看有没有成功转入连接产物，可能根本没阳性，都是假阳性，自然养不活了，这很常见。
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16楼2013-05-20 12:39:33
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堍仔

至尊木虫 (文坛精英)

优秀版主

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
lushuiw(gyesang代发): 金币+1, 鼓励回帖应助！ 2013-05-20 16:28:35
lushuiw: 金币+2 2013-05-20 21:15:45
lushuiw: 金币+4 2013-05-20 21:52:52
如果是菌像卫星菌落就很可能是氨苄的问题，但是照理说摇菌也要摇出来啊，是不是你摇菌那步出问题了啊，对了，你是蓝白斑挑选吗？还是直接挑？如果是蓝白斑的话可以把板子放冰箱时间长点，个人建议用温度计测下摇床的温度
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17楼2013-05-20 13:33:45
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lushuiw

银虫 (正式写手)
引用回帖:
16楼: Originally posted by visittings at 2013-05-20 12:39:33
也有可能是染噬菌体了，你可以把DH5a单独培养一下，看是不是能够长起来，如果也不长，说明感受态有问题。以前我也出现过DH5a会养死，下面有絮状的菌体，应该不是楼主形容的澄清。
另外一个就是抗性的问题了。楼主没 ...

结果是因为氨苄快要失效了，加到固体培养基，可能温度偏高，就完全失效了，加到液体培养基里的还有点效果，于是就摇不出来了
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18楼2013-05-20 21:15:33
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lushuiw

银虫 (正式写手)
引用回帖:
17楼: Originally posted by 堍仔 at 2013-05-20 13:33:45
如果是菌像卫星菌落就很可能是氨苄的问题，但是照理说摇菌也要摇出来啊，是不是你摇菌那步出问题了啊，对了，你是蓝白斑挑选吗？还是直接挑？如果是蓝白斑的话可以把板子放冰箱时间长点，个人建议用温度计测下摇床的 ...

最终证实是氨苄的问题，谢谢啦
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19楼2013-05-20 21:16:21
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堍仔

至尊木虫 (文坛精英)

优秀版主
引用回帖:
19楼: Originally posted by lushuiw at 2013-05-20 21:16:21
最终证实是氨苄的问题，谢谢啦...

哦，没事啦，我们去年也是因为氨苄的原因，做克隆就是这样啦，影响因素太多
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20楼2013-05-20 21:17:20
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