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lushuiw银虫 (正式写手)
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[求助]
T载体克隆做不出来，求帮助
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| 各位战友们，lz在做目的基因与T载体连接，之后转化到DH5α感受态，然后涂板，结果长的特别密，挑到液体培养基摇菌，都是澄清的。大家谁知道是怎么回事呀，做了好长时间了。 |
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【答案】应助回帖
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也有可能是染噬菌体了，你可以把DH5a单独培养一下，看是不是能够长起来，如果也不长，说明感受态有问题。以前我也出现过DH5a会养死，下面有絮状的菌体，应该不是楼主形容的澄清。 另外一个就是抗性的问题了。楼主没有做PCR鉴定吗？直接菌落PCR，看看有没有成功转入连接产物，可能根本没阳性，都是假阳性，自然养不活了，这很常见。 |
16楼2013-05-20 12:39:33
wxf8470
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2楼2013-05-19 08:45:36
wangqi1107
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【答案】应助回帖
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lushuiw: 金币+3 2013-05-20 21:51:55
| 第一做阴性对照，看是否你的抗生素是否污染了；第二，检测你的感受态细胞不转化连接产物，直接涂板，看是否污染了。第三，放一个空板，看是否倒的培养基有污染。第四，同时做一个阳性对照。再做一个连接产物转化感受态。这五个板要同时做。然后看看结果，一定能检测出来哪里出了问题。 |
3楼2013-05-19 09:44:55
sunnyboylg
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4楼2013-05-19 11:04:32