24小时热门版块排行榜    

查看: 2726  |  回复: 24
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

lushuiw

银虫 (正式写手)

[求助] T载体克隆做不出来,求帮助

各位战友们,lz在做目的基因与T载体连接,之后转化到DH5α感受态,然后涂板,结果长的特别密,挑到液体培养基摇菌,都是澄清的。大家谁知道是怎么回事呀,做了好长时间了。
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lushuiw

银虫 (正式写手)

引用回帖:
16楼: Originally posted by visittings at 2013-05-20 12:39:33
也有可能是染噬菌体了,你可以把DH5a单独培养一下,看是不是能够长起来,如果也不长,说明感受态有问题。以前我也出现过DH5a会养死,下面有絮状的菌体,应该不是楼主形容的澄清。
另外一个就是抗性的问题了。楼主没 ...

结果是因为氨苄快要失效了,加到固体培养基,可能温度偏高,就完全失效了,加到液体培养基里的还有点效果,于是就摇不出来了
18楼2013-05-20 21:15:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 25 个回答

wxf8470

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
lushuiw: 金币+2 2013-05-19 14:08:40
lushuiw: 金币+5 2013-05-20 21:52:01
从你的描述,很像是你的平板抗生素失效了。
2楼2013-05-19 08:45:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wangqi1107

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
lushuiw(myprayer代发): 金币+1, 赠人玫瑰手有余香,感谢你的慷慨解囊,期待你的精彩。 2013-05-19 10:21:46
lushuiw: 金币+2 2013-05-19 14:10:04
amisking: 回帖置顶 2013-05-19 19:55:17
lushuiw: 金币+3 2013-05-20 21:51:55
第一做阴性对照,看是否你的抗生素是否污染了;第二,检测你的感受态细胞不转化连接产物,直接涂板,看是否污染了。第三,放一个空板,看是否倒的培养基有污染。第四,同时做一个阳性对照。再做一个连接产物转化感受态。这五个板要同时做。然后看看结果,一定能检测出来哪里出了问题。
3楼2013-05-19 09:44:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sunnyboylg

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
lushuiw: 金币+2 2013-05-19 14:10:19
gyesang: 金币+1, 鼓励回帖应助! 2013-05-19 18:19:12
lushuiw: 金币+2 2013-05-20 21:52:07
1、感受态转化涂板前可在培养皿加点IPTG和x-gal用来挑转化子(蓝色的为没转化进的,白色的是转化了的);2、用空质粒转化做个对照
要么读书,要么旅行,身体和灵魂,必须有一个在路上
4楼2013-05-19 11:04:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +3 4FFAWE8HcgUD 2026-08-29 4/200 2026-08-30 20:30 by hZiFeudZyoGR
[论文投稿] 售SCI一区文章,我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +3 zICmwzsBXjbN 2026-08-29 5/250 2026-08-30 20:08 by hZiFeudZyoGR
[硕博家园] 售SCI一区文章,我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +3 AVl0JAsg9hyo 2026-08-29 5/250 2026-08-30 19:57 by hZiFeudZyoGR
[博后之家] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 jCd0dEvKHShX 2026-08-29 5/250 2026-08-30 19:46 by hZiFeudZyoGR
[考博] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +3 jCd0dEvKHShX 2026-08-29 3/150 2026-08-30 19:26 by hZiFeudZyoGR
[论文投稿] 售SCI一区T0P文章,我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +6 gy1nBQXYQJqL 2026-08-29 7/350 2026-08-30 18:18 by hZiFeudZyoGR
[硕博家园] 售SCI文章,我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +5 gy1nBQXYQJqL 2026-08-29 6/300 2026-08-30 18:17 by hZiFeudZyoGR
[公派出国] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +6 gy1nBQXYQJqL 2026-08-29 9/450 2026-08-30 17:56 by hZiFeudZyoGR
[考研] 售SCI一区文章,我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +4 gy1nBQXYQJqL 2026-08-29 6/300 2026-08-30 17:47 by hZiFeudZyoGR
[论文投稿] 售SCI一区文章,我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +5 ASdOkHsho7FD 2026-08-28 6/300 2026-08-30 17:25 by hZiFeudZyoGR
[博后之家] 售SCI文章,我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +5 gy1nBQXYQJqL 2026-08-29 8/400 2026-08-30 12:03 by l0VvVHGBGRLv
[找工作] 售SCI一区T0P文章,我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +4 gy1nBQXYQJqL 2026-08-29 8/400 2026-08-30 12:03 by l0VvVHGBGRLv
[硕博家园] 售SCI一区文章,我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +6 ASdOkHsho7FD 2026-08-28 11/550 2026-08-30 06:00 by ZPa0EcMwuECS
[基金申请] 怎么看青基中了没有啊 +5 叶九微 2026-08-26 5/250 2026-08-27 10:35 by l_zh2008
[基金申请] 为什么 国际(地区)合作与交流项目 没有放榜? 10+3 majunge000 2026-08-26 11/550 2026-08-27 08:42 by 北京莱茵编辑
[基金申请] 出来了 +9 trojank 2026-08-26 9/450 2026-08-26 14:25 by 宝贝虫子
[基金申请] 为什么国自然不能直接公布 +4 bjdxyxy 2026-08-26 4/200 2026-08-26 13:12 by qingmu1201
[基金申请] 国合里面能看到了 +7 一怀馨秋 2026-08-26 7/350 2026-08-26 11:23 by zhaosm1982
[基金申请] 国际合作可查了,中了面上 (EPI+1)(金币+50) +18 Ldrop2023 2026-08-26 18/900 2026-08-26 11:15 by cmrandy
[基金申请] 系统进不去 +4 yanglien 2026-08-26 5/250 2026-08-26 11:10 by wenfengw83
信息提示
请填处理意见