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review银虫 (著名写手)
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克隆时做酶切，只切载体还是连要插入载体的片段也要酶切呢？ 已有5人参与
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我的实验：扩增获得片段后连在载体上，再转到大肠杆菌里。 片段与载体连接时，是不是先给载体做个酶切？片段也要做吗 片段已经加A了 |
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 【分子生物】EPI帖 |
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gwd0312
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小丹木木: 金币+5, MolEPI+1, 很全面了 2012-10-10 19:22:56
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小丹木木: 金币+5, MolEPI+1, 很全面了 2012-10-10 19:22:56
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引物设计原则： 1 引物长度大于16bp,一般为20-24个核苷酸 2 引物与靶序列间的Tm值不应过低 3 引物不应有发夹结构。即不能有4bp以上的回文序列 4 两引物间不应有大于4pb以上的互补序列或同源序列，在3’端不应有任何互补碱基 5 引物中碱基的分布尽可能均匀，G+C含量接近50% 此外，你如果要加入酶切位点还要考虑酶切位点的选择啊。 1 尽量不要选择载体上面的酶； 2 尽量选择常见、经济的酶； 3 选择多个酶时要保证有合适的共用bufer。 |
6楼2012-10-10 18:48:43
gwd0312
木虫 (正式写手)
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5楼2012-10-10 17:28:18
mamadexiao
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