应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 克隆时做酶切，只切载体还是连要插入载体的片段也要酶切呢？
81/1返回列表
查看: 1828  |  回复: 7
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
本帖产生 1 个 MolEPI ，点击这里进行查看

review

银虫 (著名写手)

[交流] 克隆时做酶切，只切载体还是连要插入载体的片段也要酶切呢？ 已有5人参与

我的实验：扩增获得片段后连在载体上，再转到大肠杆菌里。
片段与载体连接时，是不是先给载体做个酶切？片段也要做吗  片段已经加A了
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

【分子生物】EPI帖

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
交流
1楼 2012-10-10 16:29:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖置顶 ( 共有1个 )

gwd0312

木虫 (正式写手)

“无冕之王”
★ ★ ★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
小丹木木: 金币+5, MolEPI+1, 很全面了 2012-10-10 19:22:56
引用回帖:
4楼: Originally posted by review at 2012-10-10 17:19:42
设计引物时要考虑哪些？请指教   谢谢了！  我初学者...

引物设计原则：
1 引物长度大于16bp,一般为20-24个核苷酸
2 引物与靶序列间的Tm值不应过低
3 引物不应有发夹结构。即不能有4bp以上的回文序列
4 两引物间不应有大于4pb以上的互补序列或同源序列，在3’端不应有任何互补碱基
5 引物中碱基的分布尽可能均匀，G+C含量接近50%
此外，你如果要加入酶切位点还要考虑酶切位点的选择啊。
1 尽量不要选择载体上面的酶；
2 尽量选择常见、经济的酶；
3 选择多个酶时要保证有合适的共用bufer。
赞一下(2人) 回复此楼
持之以恒、永不放弃！
6楼2012-10-10 18:48:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

gwd0312

木虫 (正式写手)

“无冕之王”
★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
1949stone: 金币+2, 鼓励一下 2012-10-10 16:51:44
既然要将你的目的片段连接到表达载体上，那你的载体和你的片段肯定都是要酶切的啊，你设计引物时就应该考虑了啊，而且这两次酶切用到的内切酶要一致，这样黏性末端才会互补，才能保证你后面可以连接上去啊！
赞一下(1人) 回复此楼
持之以恒、永不放弃！
2楼2012-10-10 16:41:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zy_rebecca

新虫 (初入文坛)
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
1949stone: 金币+1, 鼓励 2012-10-10 16:51:35
要的呀，要切出相同的粘性末端才能连接
赞一下(1人) 回复此楼
3楼2012-10-10 16:42:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

review

银虫 (著名写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by gwd0312 at 2012-10-10 16:41:10
既然要将你的目的片段连接到表达载体上，那你的载体和你的片段肯定都是要酶切的啊，你设计引物时就应该考虑了啊，而且这两次酶切用到的内切酶要一致，这样黏性末端才会互补，才能保证你后面可以连接上去啊！

设计引物时要考虑哪些？请指教   谢谢了！  我初学者
赞一下 回复此楼
交流
4楼2012-10-10 17:19:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

heyin89

禁虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
本帖内容被屏蔽
5楼2012-10-10 17:28:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

mamadexiao

木虫 (正式写手)
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
小丹木木: 金币+1, 鼓励交流 2012-10-11 15:53:56
加A的，你的载体是T载体么
是的话，就不用切，放一起直接连
要是连其他的载体的话，就片段和载体都切
赞一下 回复此楼
7楼2012-10-10 21:18:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lwiaanngg

铁杆木虫 (著名写手)
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
小丹木木: 金币+1, 鼓励交流 2012-10-11 15:54:05
取决于你怎么连接了，TA还是用其他的RE做的
从你的描述中，可能是TA连接了。片段加A后不用，不过载体看你用的是预先处理的还是自己要处理的
赞一下 回复此楼
8楼2012-10-10 22:17:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 review 的主题更新
81/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 一志愿985，本科211，0817化学工程与技术319求调剂 +4 Liwangman 2026-03-15 4/200 2026-03-16 08:01 by wang_dand
[考研] 274求调剂 +4 时间点 2026-03-13 4/200 2026-03-15 15:29 by Rambo13
[考研] 311求调剂 +3 26研0 2026-03-15 3/150 2026-03-15 09:12 by JourneyLucky
[考研] 289求调剂 +5 步川酷紫123 2026-03-11 5/250 2026-03-15 00:45 by kruisytel
[考研] 中科大材料与化工319求调剂 +3 孟鑫材料 2026-03-14 3/150 2026-03-14 20:10 by ms629
[考研] 328求调剂 +3 5201314Lsy！ 2026-03-13 6/300 2026-03-14 15:31 by hyswxzs
[考研] 【0703化学调剂】-一志愿华中师范大学-六级475 +5 Becho359 2026-03-11 5/250 2026-03-14 11:35 by 哦哦123
[考研] 308 085701 四六级已过求调剂 +7 温乔乔乔乔 2026-03-12 14/700 2026-03-14 10:49 by JourneyLucky
[考研] 332分材料工程调剂 +3 莓好时光海苔 2026-03-09 3/150 2026-03-14 02:03 by JourneyLucky
[考研] 求调剂 +6 yfihxh 2026-03-09 6/300 2026-03-14 01:18 by JourneyLucky
[考研] 材料工程,326分，求调剂 +6 KRSLSR 2026-03-10 6/300 2026-03-13 23:47 by JourneyLucky
[考研] 285 求调剂 资源与环境 一志愿北京化工大学 +3 未名考生 2026-03-10 3/150 2026-03-13 23:04 by JourneyLucky
[考研] 332求调剂 +3 Zz版 2026-03-13 3/150 2026-03-13 20:36 by 18595523086
[考研] 材料工程调剂 +4 咪咪空空 2026-03-11 4/200 2026-03-13 19:57 by JourneyLucky
[考研] 求b区学校调剂 +3 周56 2026-03-11 3/150 2026-03-13 16:20 by JourneyLucky
[考研] 工科278分求调剂 +5 周慢热啊 2026-03-12 7/350 2026-03-13 15:49 by JourneyLucky
[考研] 工科调剂 +4 Jiang191123！ 2026-03-11 4/200 2026-03-13 15:15 by Miko19
[考研] 085600材料与化工 309分请求调剂 +7 dtdxzxx 2026-03-12 8/400 2026-03-13 14:43 by jxchenghu
[考研] 0857环境调剂 +5 熠熠_11 2026-03-10 5/250 2026-03-11 10:59 by wang_dand
[基金申请] 提交后的基金本子，已让学校撤回了，可否换口子提交 +3 dut_pfx 2026-03-10 3/150 2026-03-11 08:38 by kudofaye
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭