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银虫 (著名写手)

[交流] 克隆时做酶切,只切载体还是连要插入载体的片段也要酶切呢? 已有5人参与

我的实验:扩增获得片段后连在载体上,再转到大肠杆菌里。
片段与载体连接时,是不是先给载体做个酶切?片段也要做吗  片段已经加A了
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zy_rebecca

新虫 (初入文坛)

★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
1949stone: 金币+1, 鼓励 2012-10-10 16:51:35
要的呀,要切出相同的粘性末端才能连接
3楼2012-10-10 16:42:48
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gwd0312

木虫 (正式写手)

“无冕之王”

★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
1949stone: 金币+2, 鼓励一下 2012-10-10 16:51:44
既然要将你的目的片段连接到表达载体上,那你的载体和你的片段肯定都是要酶切的啊,你设计引物时就应该考虑了啊,而且这两次酶切用到的内切酶要一致,这样黏性末端才会互补,才能保证你后面可以连接上去啊!
持之以恒、永不放弃!
2楼2012-10-10 16:41:10
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银虫 (著名写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by gwd0312 at 2012-10-10 16:41:10
既然要将你的目的片段连接到表达载体上,那你的载体和你的片段肯定都是要酶切的啊,你设计引物时就应该考虑了啊,而且这两次酶切用到的内切酶要一致,这样黏性末端才会互补,才能保证你后面可以连接上去啊!

设计引物时要考虑哪些?请指教   谢谢了!  我初学者
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4楼2012-10-10 17:19:42
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heyin89

禁虫 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
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5楼2012-10-10 17:28:18
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