克隆时做酶切，只切载体还是连要插入载体的片段也要酶切呢？ - 分子生物 - 综合其他

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gwd0312

木虫 (正式写手)

“无冕之王”

MolEPI: 5
应助: 131 (高中生)
金币: 1973.2
红花: 10
帖子: 418
在线: 88.3小时
虫号: 1067565
注册: 2010-08-01
性别: GG
专业: 质谱分析

★ ★ ★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
小丹木木: 金币+5, MolEPI+1, 很全面了 2012-10-10 19:22:56

引用回帖:

4楼: Originally posted by review at 2012-10-10 17:19:42
设计引物时要考虑哪些？请指教谢谢了！我初学者...

引物设计原则：
1 引物长度大于16bp,一般为20-24个核苷酸
2 引物与靶序列间的Tm值不应过低
3 引物不应有发夹结构。即不能有4bp以上的回文序列
4 两引物间不应有大于4pb以上的互补序列或同源序列，在3’端不应有任何互补碱基
5 引物中碱基的分布尽可能均匀，G+C含量接近50%
此外，你如果要加入酶切位点还要考虑酶切位点的选择啊。
1 尽量不要选择载体上面的酶；
2 尽量选择常见、经济的酶；
3 选择多个酶时要保证有合适的共用bufer。