应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » pcr产物胶回收浓度低，能不能和T载体连接
171/2返回列表12下一页
查看: 5426  |  回复: 16
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

weining1203

新虫 (小有名气)

[求助] pcr产物胶回收浓度低，能不能和T载体连接

小弟最近做基因克隆，目的片段2200bp，pcr产物条带亮度和2000的marker差不多，pcr体系为50ul，全部用来胶回收，回收后浓度太低，只有16ng/ul
,不知道能不能和T载体连接？ T载体为 pMD-18T  simple Vector。求大神指点
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2012-09-30 21:40:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gwd0312

木虫 (正式写手)

“无冕之王”

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你可以将你的回收产物浓缩一下！
赞一下 回复此楼

» 本帖已获得的红花（最新10朵）

weining1203
持之以恒、永不放弃！
2楼2012-09-30 21:52:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

weining1203

新虫 (小有名气)
送鲜花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by gwd0312 at 2012-09-30 21:52:48
你可以将你的回收产物浓缩一下！

怎样浓缩谢谢
回复此楼
3楼2012-09-30 21:56:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wzqno

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+1, 鼓励交流 2012-10-01 20:09:49
引用回帖:
3楼: Originally posted by weining1203 at 2012-09-30 21:56:55
怎样浓缩谢谢...

多PCR几管，可以四五个泳道的用一个回收柱回收，而且溶胶液至少通过回收柱两次，最后洗脱的时候40℃预热一下，也洗脱两次，浓度应该会高些
赞一下 回复此楼
4楼2012-09-30 23:20:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+3, 鼓励交流 2012-10-01 20:10:06
不知道为什么你需要浓度更高。做连接用不了多少的吧。不知道你具体用的是什么T-vector, 20 ul连接体系放50ng载体，目的片段需要50*2.2/载体大小*3 （ng）。浓度16ng的片段你有个10 ul也足够了。
赞一下 回复此楼

» 本帖已获得的红花（最新10朵）

weining1203
5楼2012-10-01 05:49:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

weining1203

新虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by wzqno at 2012-09-30 23:20:50
多PCR几管，可以四五个泳道的用一个回收柱回收，而且溶胶液至少通过回收柱两次，最后洗脱的时候40℃预热一下，也洗脱两次，浓度应该会高些...

谢谢
回复此楼
6楼2012-10-01 08:29:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

weining1203

新虫 (小有名气)
送鲜花一朵
引用回帖:
5楼: Originally posted by cicelyzh at 2012-10-01 05:49:21
不知道为什么你需要浓度更高。做连接用不了多少的吧。不知道你具体用的是什么T-vector, 20 ul连接体系放50ng载体，目的片段需要50*2.2/载体大小*3 （ng）。浓度16ng的片段你有个10 ul也足够了。

T载体为 pMD-18T  simple Vector，说明书连接体系只有5ul：                                  Vector         1ul（50ng）
                                                          insert   dna            X ul
                                                                   d水       up to 5ul
就算加4ul的dna，浓度不过64ng，可说明书要求Vector ：insert dna为1:2-10，是不是只能提高胶回收的浓度啦，求指点
另外，说明说Insert DNA的使用量（ng）= nmol数*660*insert dna的bp数，这个nmol数是质粒的还是dna的，怎么知道他的mol数
赞一下 回复此楼
7楼2012-10-01 08:44:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jlwang201

禁虫 (小有名气)
感谢参与，应助指数 +1
本帖内容被屏蔽
8楼2012-10-01 12:14:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

weining1203

新虫 (小有名气)
引用回帖:
8楼: Originally posted by jlwang201 at 2012-10-01 12:14:35
可以，除了质粒，其他全部加成你的目标条带溶液，我以前做过！

谢谢
回复此楼
9楼2012-10-01 19:17:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jw1985629

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
要看亮度，对比着marker来看，基本上不弱于marker就可以，跟它一样亮貌似就知道包含多少核酸量了，具体数我忘记了
赞一下 回复此楼
i still have so much to do
10楼2012-10-01 23:13:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 weining1203 的主题更新
171/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 范进中举一文的中心思想 +5 炎黄贵胄 2026-08-22 6/300 2026-08-24 06:34 by sincosx
[基金申请] 2026国自然函评费到账 +16 羊腰板 2026-08-21 17/850 2026-08-23 23:02 by tianxiaochun
[基金申请] 让我中一个面上吧！ +12 大萍1987 2026-08-20 15/750 2026-08-23 20:44 by 大萍1987
[基金申请] 2026年的国家社科基金项目通讯评审的新规则与新动向、新挑战 +4 process2012 2026-08-23 5/250 2026-08-23 19:58 by jurkat.1640
[基金申请] 今天放榜吗？ +15 布布和一二 2026-08-19 16/800 2026-08-23 09:55 by 张春生
[基金申请] filecode，4个jtjc了 +13 ziyangfang 2026-08-19 16/800 2026-08-22 17:08 by WH3796
[基金申请] 人气不行了 +8 fansofjerry 2026-08-21 8/400 2026-08-22 16:30 by zyqchem
[基金申请] 今天基金会出结果吗？20260819 +16 kkkl_v 2026-08-19 17/850 2026-08-22 16:12 by 阿布Abu
[基金申请] 时间戳今天，20号变了 +5 archvillain 2026-08-20 5/250 2026-08-22 06:12 by hui_daxiao
[基金申请] 放榜前的不淡定 40+4 snowwithsea 2026-08-19 14/700 2026-08-21 23:51 by cratir
[基金申请] 科研孤儿太难了 +17 我4大白菜 2026-08-20 18/900 2026-08-21 20:57 by zhangev
[基金申请] 看来今天不会放榜了？ +8 chengyan1220 2026-08-21 11/550 2026-08-21 17:52 by dcqxinyang
[基金申请] 感觉是下周放榜了 +7 angus9576 2026-08-17 12/600 2026-08-21 13:38 by weiyin
[基金申请] 我面上完蛋了 +7 且听虎啸 2026-08-20 8/400 2026-08-21 12:31 by 酷酷墨镜
[基金申请] 应该是下周三26日公布了吧？ +4 哈哈蛤？ 2026-08-21 4/200 2026-08-21 10:58 by Vivilian
[论文投稿] 投稿咨询 +5 wwm09 2026-08-17 7/350 2026-08-21 10:11 by 期刊论文帮手
[基金申请] 时间戳变了，能看出什么问题？ +18 基诺咪客 2026-08-17 23/1150 2026-08-20 17:19 by Godzela
[基金申请] 重要消息，中午系统在维护 +11 yuleib84 2026-08-18 12/600 2026-08-20 11:09 by xskun
[基金申请] 朋友圈看到的 +6 wangzilk 2026-08-18 8/400 2026-08-19 10:55 by Haru815
[基金申请] 明天放榜？ +5 Shxjjxjkx 2026-08-18 5/250 2026-08-18 18:14 by -大大大大大-
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭