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【求助/交流】为什么100+bp的PCR产物回收后测浓度很低?
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西-南
新虫
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[交流]
【求助/交流】为什么100+bp的PCR产物回收后测浓度很低?
已有4人参与
PCR产物是170+和110+两个片段,用200ul的PCR产物回收和500ul的PCR产物回收所得浓度一样,170+只有80ng/ul,110+的只有40ng/ul。因为对产物浓度要求较高,这个浓度根本无法满足后续实验要求
,请问是因为片段太小分光光度计测量问题,还是回收试剂盒问题(试剂盒用的天根的凝胶回收试剂盒)?需要怎么改进?
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1楼
2010-09-06 10:50:37
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西-南
新虫
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注册: 2009-03-02
如果是试剂盒有问题,请大家推荐个好用的小片段PCR产物回收试剂盒
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2楼
2010-09-06 11:04:15
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capsaicine
铁杆木虫
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虫号: 1078679
注册: 2010-08-20
性别: GG
专业: 植物遗传学
多PCR一些,小片段是容易丢失的,提高扩增的产量,回收的量就可以保证了!
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3楼
2010-09-17 18:44:37
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aaron2012
银虫
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虫号: 1069060
注册: 2010-08-04
性别: GG
专业: 生物大分子结构与功能
★
小木虫(金币
+0.5
):给个红包,谢谢回帖交流
可以适当的增加一些循环数 或者像楼上说的P几次再回收
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生物,特别是分子生物,贵在坚持!
4楼
2010-09-17 22:55:18
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蔷薇泡泡22
新虫
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在线: 2.5小时
虫号: 3073901
注册: 2014-03-20
专业: 动物遗传学
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
小于300bp的要加异丙醇提高回收率。我的202bp,用250ul体系回收的浓度达到100以上,建议楼主加异丙醇试一下,祝你成功!
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5楼
2015-12-09 15:54:44
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