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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】PCR产物与T载体的连接的实验原理？
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liuyuxue

铁杆木虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】PCR产物与T载体的连接的实验原理？ 已有5人参与

如题。多谢！
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花落人亡两不知
1楼 2010-04-22 11:16:49
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fascinating

银虫 (正式写手)
★ ★ ★
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1949stone(金币+2): 2010-04-22 14:43
TA克隆：TA克隆系统由Invitrogen公司（San Diego，CA）发展而来的商业性试剂盒，它用PCR产物的克隆和测序。其原理是利用Taq酶能够在PCR产物的3’末端加上一个非模板依赖的A，而T载体是一种带有3’T突出端的载体，在连接酶作用下，可以快速地、一步到位地把PCR产物直接插入到质粒载体的多克隆位点（MCS）中。TA克隆没有方向性。
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2楼2010-04-22 12:50:41
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fungixx

至尊木虫 (文坛精英)

优秀版主优秀版主优秀版主
★ ★ ★
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1949stone(金币+2):谢谢 2010-04-22 14:43

普通taq酶都能在3‘末端添加A，真好和T-载体上突出的T配对连接上
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几年前踏上火车那一刻都还没有意识到,从此故乡只有冬夏,再无春秋
3楼2010-04-22 12:57:21
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amilie030312

金虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
基因克隆第三版自己看去吧。
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4楼2010-04-22 15:08:34
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wlihust

铜虫 (小有名气)
PCR时，Tag酶会自动的在PCR产物的3‘末端加个A尾，而T载体是有一个T的突出末端，通过碱基配对原理，PCR产物就会在连接酶的作用下与T载体进行相连。
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5楼2010-04-22 15:46:53
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sarah-miao

银虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
PCR时候不要选择保真酶，扩出来的不带A，需要再进行加A才能进行T克隆
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6楼2012-11-28 15:28:49
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