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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 急!要连表达载体的目的片段可以是PCR后回收的产物吗？已经连中间载体验证过了
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sunny_andy

金虫 (小有名气)

[求助] 急!要连表达载体的目的片段可以是PCR后回收的产物吗？已经连中间载体验证过了

用高保真酶PCR后，转化，验证，测序，结果都是正确的
然后双酶切回收目的片段，没回收出来
所以想着都已经验证测序了，能不能拿保存的转化子再培养后直接PCR  然后回收PCR产物  ， 连接表达载体？
急！
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1楼2012-05-21 19:56:47
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sunny_andy

金虫 (小有名气)
双酶切后 跑的电泳图表明酶切还不错  能不能用双酶切后的产物PCR 然后回收 最后连表达载体？
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2楼2012-05-21 20:01:06
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lxj341401

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
西瓜: 金币+2, 专家考核, 辛苦~ 2012-05-22 08:30:28
能连，但是连后要重新测序验证，这样的实验才没有漏洞。不管怎么保真性的酶，PCR都会造成突变，只是突变的几率更小而已。
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3楼2012-05-21 20:14:35
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liujianmin68

木虫 (职业作家)

努力发展交叉学科

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
sunny_andy: 金币+1, ★★★很有帮助 2012-05-22 18:53:38
同意楼上的答案，是可以连接的，PCR还用高保真酶，载体构建完成后，把你的引物也给公司，让他们给你测序看看是否发生突变，没有突变就没什么问题了。
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转向地质微生物学
4楼2012-05-22 07:57:50
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