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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 【求助/交流】PCR产物切胶回收，总是有一条杂带的大小是目的片段的两倍大小
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xiaoyu1014126

木虫 (正式写手)

[求助] 【求助/交流】PCR产物切胶回收，总是有一条杂带的大小是目的片段的两倍大小

PCR产物切胶回收，总是有一条杂带的大小是目的片段的两倍大小，有没有人遇到同样的问题？有没有人知道是什么原因！
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1楼2011-03-09 22:25:16
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翱宇

禁虫 (正式写手)

将军
xiaoyu1014126(金币+1): 2011-03-10 09:44:19
实验会有很多怪现象，建议楼主还是配置浓度高的胶，重新跑吧，切割真正的目的条带再说！
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2楼2011-03-09 22:35:45
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susizheng

木虫 (著名写手)

我們是糖 甜到憂傷
xiaoyu1014126(金币+1): 微生物分子实验确实很多现象无法解释无法理解 2011-03-10 09:44:51
遇到过这种问题，可能是试剂盒轻度污染造成了，特别是实验室很多人做实验，共用Kit的情况下。如果杂带比较淡，不影响后续实验。
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Thank-you，so-blue.
3楼2011-03-10 08:58:34
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wuw579

铁杆木虫 (正式写手)
又或者是你可以在回收之前的电泳时间长些   产物跑的开一些
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4楼2011-03-12 19:10:22
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rainwander

铁杆木虫 (知名作家)

优秀版主
试剂盒污染的可能性比较大
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千万不要因为走的太久，而忘记了我们为什么出发~~~~~~ForDream~~~~~~
5楼2011-03-12 19:28:50
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sandisk411

新虫 (小有名气)

可能是解链了。

我们曾测序，这样的片段确是目的条带的。
很有可能是割胶后融胶温度或时间足够长，导致DNA双链解链了。
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6楼2011-03-13 15:14:05
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chenshuai1238

金虫 (初入文坛)
引用回帖:
Originally posted by susizheng at 2011-03-10 08:58:34:
遇到过这种问题，可能是试剂盒轻度污染造成了，特别是实验室很多人做实验，共用Kit的情况下。如果杂带比较淡，不影响后续实验。

PCR胶回收才用试剂盒，我想楼主说的是在紫外下看胶的时候出现了一条杂带。静候大侠指教。
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7楼2011-03-13 19:43:18
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smiled001

禁虫 (小有名气)
本帖内容被屏蔽
8楼2011-03-13 20:05:28
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神仙湾的鹰

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
8楼: Originally posted by smiled001 at 2011-03-13 20:05:28
我也试过出现这种情况
DNA双链解链的可能性感觉挺大的

你好 我做的是融合PCR 融合后做完切胶回收 还是有杂带 我溶胶时时60℃ 7min 然后混匀。我想问问 你的有杂带问题是怎么解决的啊 谢谢了
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9楼2014-03-13 11:20:49
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