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王者归来001

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
可以的,连接的时候DNA多加一点就好了

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坚持不懈,终会成功!
11楼2012-10-01 23:47:21
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
weining1203: 金币+8, ★★★很有帮助, 非常感谢您!因为没做过,周围也没有认真做,所以不知如何下手 2012-10-02 08:23:28
引用回帖:
7楼: Originally posted by weining1203 at 2012-10-01 08:44:25
T载体为 pMD-18T  simple Vector,说明书连接体系只有5ul:                                  Vector         1ul(50ng)
                                                          insert   dna            ...

我知道说明上是10ul体系,不过你可以连20ul,载体和片段用量一样,也就是稀释一倍的体系。一般试剂盒的vector是按数给的,buffer总是多一些的。不用知道DNA的mol数,因为粗略地算,双链DNA的分子量与碱基数成正比。一般做连的话是载体:插入片段的分子数=1:3. 载体放50ng。我上面已经给你写了公式,插入片段ng数=50*2.2/2.7*3=122 ng。你的浓度为16ng/ul,需7.6 ul。虽然大于5,可以用20ul体系连,加10ul的buffer,1ul酶,1ul载体,0.4ul水。
12楼2012-10-02 07:13:31
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weining1203

新虫 (小有名气)

送鲜花一朵
引用回帖:
11楼: Originally posted by 王者归来001 at 2012-10-01 23:47:21
可以的,连接的时候DNA多加一点就好了

谢谢
13楼2012-10-02 08:24:01
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thaw

铜虫 (小有名气)

不用浓缩,只要看得到带就已经很多个COPY了,你需要不了太多的,只要连上几个就足够了。我们用全式金的载体室温5分钟搞定

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

14楼2012-10-03 13:56:43
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weining1203

新虫 (小有名气)

送鲜花一朵
引用回帖:
14楼: Originally posted by thaw at 2012-10-03 13:56:43
不用浓缩,只要看得到带就已经很多个COPY了,你需要不了太多的,只要连上几个就足够了。我们用全式金的载体室温5分钟搞定

谢谢
15楼2012-10-04 10:09:23
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sarah-miao

银虫 (正式写手)

连T载体很容易就连上了哈,如果是其他的克隆载体,下次多P几管, 胶回收时候尽量减少凝胶量,另外,elutent放在65度预热也可以的
16楼2012-11-28 15:15:15
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莓林塔

木虫 (小有名气)

前几天刚做过17ng的   没问题!也用的PMD18T simple V   没问题!
17楼2013-05-19 13:26:38
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