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lushuiw

银虫 (正式写手)

[求助] T载体克隆做不出来，求帮助

各位战友们，lz在做目的基因与T载体连接，之后转化到DH5α感受态，然后涂板，结果长的特别密，挑到液体培养基摇菌，都是澄清的。大家谁知道是怎么回事呀，做了好长时间了。
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1楼2013-05-19 08:38:57
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lushuiw

银虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by wxf8470 at 2013-05-19 08:45:36
从你的描述，很像是你的平板抗生素失效了。

我觉得也是，又换了抗生素，果然长的少了，可是挑出来，摇了4个多小时，还是澄清的
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6楼2013-05-19 14:09:53
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wxf8470

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
lushuiw: 金币+2 2013-05-19 14:08:40
lushuiw: 金币+5 2013-05-20 21:52:01
从你的描述，很像是你的平板抗生素失效了。
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2楼2013-05-19 08:45:36
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wangqi1107

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
lushuiw(myprayer代发): 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，感谢你的慷慨解囊，期待你的精彩。 2013-05-19 10:21:46
lushuiw: 金币+2 2013-05-19 14:10:04
amisking: 回帖置顶 2013-05-19 19:55:17
lushuiw: 金币+3 2013-05-20 21:51:55
第一做阴性对照，看是否你的抗生素是否污染了；第二，检测你的感受态细胞不转化连接产物，直接涂板，看是否污染了。第三，放一个空板，看是否倒的培养基有污染。第四，同时做一个阳性对照。再做一个连接产物转化感受态。这五个板要同时做。然后看看结果，一定能检测出来哪里出了问题。
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3楼2013-05-19 09:44:55
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sunnyboylg

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
lushuiw: 金币+2 2013-05-19 14:10:19
gyesang: 金币+1, 鼓励回帖应助！ 2013-05-19 18:19:12
lushuiw: 金币+2 2013-05-20 21:52:07
1、感受态转化涂板前可在培养皿加点IPTG和x-gal用来挑转化子（蓝色的为没转化进的，白色的是转化了的）；2、用空质粒转化做个对照
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要么读书，要么旅行，身体和灵魂，必须有一个在路上
4楼2013-05-19 11:04:32
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