| 查看: 3273 | 回复: 15 | |||
[求助]
基因敲除的假阳性问题 已有1人参与
|
| 本人做大肠的基因敲除实验，做了很多批，可是都是假阳性，操作步骤也都是按照文献上讲的，电转后涂卡纳平板，平板上会长，但菌落鉴定都不是重组菌，DpnⅠ也换过了，现在不知道哪里出了问题，求帮助啊~~~~~~~ |
回复此楼» 猜你喜欢
留学--博士招生
已经有16人回复
-
化学工程，本211，求调剂，ab区不限
已经有4人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有193人回复
-
湖北师范大学招调剂啦
已经有7人回复
-
邵阳学院食品与化学工程学院硕士调剂
已经有0人回复
-
天津商业大学 生物与医药课题组招生
已经有0人回复
-
生物化工学硕招收调剂
已经有0人回复
-
广东石油化工学院2026年硕士研究生需要多名生物，制药工程，食品专业的调剂生
已经有0人回复
-
317分 一志愿江南大学 化学工程学硕 求调剂
已经有6人回复
-
化工申博
已经有3人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 真菌转化子PCR验证问题
已经有20人回复
- 请教一下，这是否为假阳性克隆的问题，如果是，该如何提高阳性克隆效率？
已经有20人回复
- 大肠杆菌连接转化假阳性很多
已经有5人回复
- TA克隆为什么总是假阳性啊？
已经有39人回复
- 【Journal Club】第3讲 水稻全基因组基因网络生物信息学平台的建立
已经有33人回复
- T载体连接目的片段后做蓝白斑全都是假阳性
已经有6人回复
- 基因敲除细胞阳性纯和子筛选
已经有10人回复
- 克隆假阳性的问题
已经有3人回复
- 鸡肝中氯霉素检测为何出现假阳性？（ELISA检测）
已经有5人回复
- PCR阴性对照假阳性问题
已经有25人回复
- 【求助/交流】连接实验假阳性加多如何解决
已经有20人回复
- 【求助/交流】基因敲除试验
已经有23人回复
- 【求助/交流】蓝白斑假阳性的困惑
已经有3人回复
- 【求助/交流】基因敲除问题
已经有5人回复
- 【求助/交流】关于基因敲除
已经有21人回复
- 【求助/交流】假阳性是什么原因造成的？
已经有7人回复
- 【求助/交流】洋葱瞬时表达 假阳性
已经有6人回复
- 【求助/交流】请教关于大肠杆菌lamda RED重组问题
已经有23人回复
2楼2013-06-08 22:50:15
凌波丽
专家顾问 (知名作家)
-
专家经验: +218 - MolEPI: 44
- 应助: 397 (硕士)
- 贵宾: 0.044
- 金币: 2118.9
- 散金: 10
- 红花: 208
- 帖子: 5633
- 在线: 571.6小时
- 虫号: 1766465
- 注册: 2012-04-19
- 性别: MM
- 专业: 生物大分子结构与功能
- 管辖: 生物科学综合
3楼2013-06-08 23:41:03
4楼2013-06-09 10:38:47
5楼2013-06-09 11:43:45
6楼2013-06-09 15:03:26
【答案】应助回帖
★ ★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2013-06-11 11:09:04
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2013-06-11 11:09:04
|
1.确定你的同源臂大小，虽然理论上是50bp就够了，但是如果同源臂同源性太好会容易打偏，我师兄是这么解释的 2. 我自己的经验是dpnI切过夜，然后电转，后培养过夜后离心，把菌溶200微左右全部涂一个板子上。我用的是慢切酶，曾经就是有次偷懒没切，电了2次都没阳性，切了之后终于有阳性了。 3. 我感觉还是凭运气，还有感受态问题吧，我感觉转一次到两次基本肯定会有，3次转不出来就重新做感受态继续电了，感受态挺重要的，长太过或者啥的影响挺大。 最后祝实验顺利，欢迎一起交流大肠杆菌敲除的问题。 [ 发自手机版 http://muchong.com/3g ] |
7楼2013-06-11 00:57:36
8楼2013-06-13 09:57:34
9楼2013-06-13 21:39:25
10楼2013-06-14 10:48:40
10