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基因敲除的假阳性问题 已有1人参与
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| 本人做大肠的基因敲除实验，做了很多批，可是都是假阳性，操作步骤也都是按照文献上讲的，电转后涂卡纳平板，平板上会长，但菌落鉴定都不是重组菌，DpnⅠ也换过了，现在不知道哪里出了问题，求帮助啊~~~~~~~ |
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2楼2013-06-08 22:50:15
凌波丽
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3楼2013-06-08 23:41:03
4楼2013-06-09 10:38:47
5楼2013-06-09 11:43:45
6楼2013-06-09 15:03:26
【答案】应助回帖
★ ★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2013-06-11 11:09:04
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1.确定你的同源臂大小，虽然理论上是50bp就够了，但是如果同源臂同源性太好会容易打偏，我师兄是这么解释的 2. 我自己的经验是dpnI切过夜，然后电转，后培养过夜后离心，把菌溶200微左右全部涂一个板子上。我用的是慢切酶，曾经就是有次偷懒没切，电了2次都没阳性，切了之后终于有阳性了。 3. 我感觉还是凭运气，还有感受态问题吧，我感觉转一次到两次基本肯定会有，3次转不出来就重新做感受态继续电了，感受态挺重要的，长太过或者啥的影响挺大。 最后祝实验顺利，欢迎一起交流大肠杆菌敲除的问题。 [ 发自手机版 http://muchong.com/3g ] |
7楼2013-06-11 00:57:36
8楼2013-06-13 09:57:34
9楼2013-06-13 21:39:25
10楼2013-06-14 10:48:40
