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半夏今年

新虫 (初入文坛)

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[求助] 基因敲除的假阳性问题已有1人参与

本人做大肠的基因敲除实验，做了很多批，可是都是假阳性，操作步骤也都是按照文献上讲的，电转后涂卡纳平板，平板上会长，但菌落鉴定都不是重组菌，DpnⅠ也换过了，现在不知道哪里出了问题，求帮助啊~~~~~~~

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1楼 2013-06-08 19:02:28

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半夏今年

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引用回帖:

7楼: Originally posted by melisax at 2013-06-11 00:57:36
1.确定你的同源臂大小，虽然理论上是50bp就够了，但是如果同源臂同源性太好会容易打偏，我师兄是这么解释的
2. 我自己的经验是dpnI切过夜，然后电转，后培养过夜后离心，把菌溶200微左右全部涂一个板子上。我用的是 ...

谢谢了，我有几个问题：1、什么叫同源性太好容易打偏？难道不是同源性越高越好吗，我一直这么以为的，，，，，
2、电转后我是加1微升LB复苏，在EP管里面，一般复苏时间是2-3小时，如果过夜的话小EP管里的溶氧肯定不够的，这样可以吗？
3、感受态我一直是现做现用，我每次做都能长菌，但都是假阳性的