应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】假阳性是什么原因造成的？
81/1返回列表
查看: 2179  |  回复: 7
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

阳光金鱼唐

金虫 (著名写手)

[交流] 【求助/交流】假阳性是什么原因造成的？ 已有7人参与

蓝白斑筛选，长出了蓝斑和白斑，我挑白斑扩大培养，然后以菌液为模板，用目的片段的引物做PCR，却得不到我要的目的片段，是目的片段与载体没连接上吗？还是没转化成功？是假阳性吗？因为检测不出来，我目前也没法送去测序，急！！！还有，我后来重复做了多次，都长不出任何东西了，是不是载体放过期了，还是T4连接酶失效了？试剂盒从买回来到现在超过半年了，第一次动用是在4个月前，中间又用过几次。哪位大虾能够答疑，在下将感激涕零！
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
不知道什么是生活了，也不知道生活是什么了
1楼 2010-04-29 13:29:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

fungixx

至尊木虫 (文坛精英)

优秀版主优秀版主优秀版主
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
lstt09nk(金币+1): 2010-04-29 15:29
应该是没有连上吧，假阳性原因很多：可能是X-gal 和IPTG没有涂开，也有可能染菌等
载体放-20°放个一年应该没有问题，至于连接酶失效有这种可能，你可以换一下吧
T载体连接是挺容易的  再做一次吧
赞一下(2人) 回复此楼
几年前踏上火车那一刻都还没有意识到,从此故乡只有冬夏,再无春秋
2楼2010-04-29 14:00:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yujiaping1

木虫 (著名写手)
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
lstt09nk(金币+2):热心虫友~~ 2010-04-29 15:29
第一个问题，你挑的白斑是含有插入片段载体的菌，这是毋庸置疑的，因为如果载体自连，那么就是蓝斑，如果没有载体，菌就没有抗性，无法生长，所以一定是含有插入片段载体的菌，但是这个插入片段不一定是目的片段，造成这种现象的原因很多，PCR产物不纯，连接上引物片段，或者存在质粒污染等，针对这种现象，一般就是多挑白斑，筛选到阳性克隆。

第二个问题，我认为你的载体半年肯定不会有问题，而且之前你成功的获得了阳性克隆，现在建议你做一下试剂盒提供的对照，如果没有问题，就说明的目的片段的浓度和载体的配比或者是目的片段太长，连接失败造成的。
但就目前的情况看，你连蓝斑都看不见了，估计你做对照也不一定能行，所以很有可能是你的培养基或者抗性之类的出问题了，好好检查一下
赞一下(3人) 回复此楼
3楼2010-04-29 15:02:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

shengwufenzi

金虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
我觉得是你的抗生素的问题
赞一下(2人) 回复此楼
4楼2010-04-29 15:54:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gaiyf

金虫 (正式写手)
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
lstt09nk(金币+2):感谢交流~~ 2010-04-29 16:26
第一个问题解决如下：你可以在菌斑长出来之后，放在4度至少4小时，这样一些本来是白斑的假阳性就会变成蓝斑。
第二个问题：可能的情况很多，首先怀疑试剂盒出问题是对的。因为反复冻融会使试剂盒失效。另外感受态也是很重要的一个环节，感受态制备不好，所以就不会长任何东西。
赞一下(2人) 回复此楼
多看文献，多学知识
5楼2010-04-29 16:22:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

liyong1981

金虫 (正式写手)
原因好多，抗生素啊，杂菌啊，或者IPTG除了问题，只能一样样排查了～
赞一下 回复此楼
6楼2010-04-29 16:51:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

peipeiliu

新虫 (初入文坛)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
有可能是你的连接酶失效了
赞一下(1人) 回复此楼
7楼2010-05-07 01:15:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhang3shan

金虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
我也是，蓝白斑筛选，长出了蓝斑和白斑，我挑白斑扩大培养，然后以菌液为模板，用目的片段的引物做PCR，未得到目的片段，X-Gal和IPTG先加在培养基里，后倒平板，不知道问题出在哪，不知道你找到原因没，能不能帮我分析下，谢谢亲
赞一下 回复此楼
star
8楼2014-01-14 21:35:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 阳光金鱼唐 的主题更新
81/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 288求调剂 +6 于海海海海 2026-03-19 6/300 2026-03-19 12:33 by peike
[考研] 一志愿985，本科211，0817化学工程与技术319求调剂 +10 Liwangman 2026-03-15 10/500 2026-03-19 10:25 by 无际的草原
[考研] 328求调剂，英语六级551，有科研经历 +3 生物工程调剂 2026-03-17 7/350 2026-03-18 20:41 by Wangjingyue
[考研] 295求调剂 +3 一志愿京区211 2026-03-18 5/250 2026-03-18 17:03 by zhaoqian0518
[考研] 化学工程321分求调剂 +15 大米饭！ 2026-03-15 18/900 2026-03-18 14:52 by haxia
[考研] 302求调剂 +10 呼呼呼。。。。 2026-03-17 10/500 2026-03-18 12:45 by Linda Hu
[考研] 265求调剂 +3 梁梁校校 2026-03-17 3/150 2026-03-18 09:12 by zhukairuo
[考研] 332求调剂 +6 Zz版 2026-03-13 6/300 2026-03-17 17:03 by ruiyingmiao
[论文投稿] 有没有大佬发小论文能带我个二作 +3 增锐漏人 2026-03-17 4/200 2026-03-17 09:26 by xs74101122
[考研] 278求调剂 +3 Yy7400 2026-03-13 3/150 2026-03-17 08:24 by laoshidan
[考研] 283求调剂 +3 听风就是雨； 2026-03-16 3/150 2026-03-17 07:41 by 热情沙漠
[考研] 318求调剂 +3 Yanyali 2026-03-15 3/150 2026-03-16 16:41 by houyaoxu
[考研] 085600材料与化工 求调剂 +13 enenenhui 2026-03-13 14/700 2026-03-16 15:19 by 了了了了。。
[考研] 材料与化工 323 英一+数二+物化，一志愿：哈工大 本人本科双一流 +4 自由的_飞翔 2026-03-13 5/250 2026-03-14 19:39 by hmn_wj
[考研] 中科大材料专硕319求调剂 +3 孟鑫材料 2026-03-13 3/150 2026-03-14 18:10 by houyaoxu
[考研] 招收0805（材料）调剂 +3 18595523086 2026-03-13 3/150 2026-03-14 00:33 by 123%、
[考研] 304求调剂 +6 Mochaaaa 2026-03-12 7/350 2026-03-13 22:18 by 星空星月
[硕博家园] 085600 260分求调剂 +3 天空还下雨么 2026-03-13 5/250 2026-03-13 18:46 by 天空还下雨么
[考研] 0817化学工程与技术考研312分调剂 +3 T123 tt 2026-03-12 3/150 2026-03-13 10:49 by houyaoxu
[考研] 321求调剂（食品/专硕） +3 mxcz321 2026-03-12 6/300 2026-03-13 08:45 by xc321
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭