| 查看: 2775 | 回复: 7 | |||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | |||
阳光金鱼唐金虫 (著名写手)
|
[交流]
【求助/交流】假阳性是什么原因造成的？ 已有7人参与
|
||
| 蓝白斑筛选，长出了蓝斑和白斑，我挑白斑扩大培养，然后以菌液为模板，用目的片段的引物做PCR，却得不到我要的目的片段，是目的片段与载体没连接上吗？还是没转化成功？是假阳性吗？因为检测不出来，我目前也没法送去测序，急！！！还有，我后来重复做了多次，都长不出任何东西了，是不是载体放过期了，还是T4连接酶失效了？试剂盒从买回来到现在超过半年了，第一次动用是在4个月前，中间又用过几次。哪位大虾能够答疑，在下将感激涕零！ |
回复此楼» 猜你喜欢
生物质炭与活化剂氢氧化钾混合注意事项
已经有0人回复
-
科研人必读：新一代 KRAS G12C 抑制剂 Olomorasib 的研究进展
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有79人回复
-
BT-11（Omilancor）研究化合物全解析：从分子结构到实验应用要点
已经有0人回复
-
富马酸贝达喹啉：二芳基喹啉类工具化合物的化学特征
已经有0人回复
-
BT投稿with editor状态快两周了，正常吗
已经有25人回复
-
Silevertinib（BDTX-1535）结构拆解：炔基双环片段为何成为合成瓶颈
已经有0人回复
-
RO4929097 解析：双苯并氮杂䓬骨架与 Notch 通路实验设计要点
已经有0人回复
-
分子量 1157 的 PROTAC 怎么配不析出：SGK3-PROTAC1 的溶解、分装与图谱复核
已经有0人回复
-
logP 6.1 的羧酸怎么配母液：GSK 650394 的溶解窗口与稀释顺序
已经有0人回复
-
从"水不溶"到 71 mg/mL：雷特格韦的 pH 依赖溶解与螯合色谱边界
已经有0人回复
» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- PCR目的条带没跑出，但是跑出了特异性很强的单一条带，是什么原因呢？
已经有9人回复
- T载体连接目的片段后做蓝白斑全都是假阳性
已经有6人回复
- 克隆假阳性的问题
已经有3人回复
- 鸡肝中氯霉素检测为何出现假阳性？（ELISA检测）
已经有5人回复
- PCR阴性对照假阳性问题
已经有25人回复
- 【求助/交流】连接实验假阳性加多如何解决
已经有20人回复
- 【求助/交流】测序问题，求助高手。
已经有8人回复
- 【求助/交流】洋葱瞬时表达 假阳性
已经有6人回复
7楼2010-05-07 01:15:25
fungixx
至尊木虫 (文坛精英)
- 应助: 37 (小学生)
- 贵宾: 3.458
- 金币: 19552.6
- 散金: 18645
- 红花: 118
- 沙发: 273
- 帖子: 13327
- 在线: 2033小时
- 虫号: 860534
- 注册: 2009-09-30
- 专业: 抗肿瘤药物药理
2楼2010-04-29 14:00:08
yujiaping1
木虫 (著名写手)
- MolEPI: 3
- 应助: 1 (幼儿园)
- 金币: 1365.2
- 散金: 10
- 红花: 5
- 帖子: 1174
- 在线: 66.6小时
- 虫号: 929883
- 注册: 2009-12-17
- 性别: MM
- 专业: 疫苗学
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
lstt09nk(金币+2):热心虫友~~ 2010-04-29 15:29
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
lstt09nk(金币+2):热心虫友~~ 2010-04-29 15:29
|
第一个问题，你挑的白斑是含有插入片段载体的菌，这是毋庸置疑的，因为如果载体自连，那么就是蓝斑，如果没有载体，菌就没有抗性，无法生长，所以一定是含有插入片段载体的菌，但是这个插入片段不一定是目的片段，造成这种现象的原因很多，PCR产物不纯，连接上引物片段，或者存在质粒污染等，针对这种现象，一般就是多挑白斑，筛选到阳性克隆。 第二个问题，我认为你的载体半年肯定不会有问题，而且之前你成功的获得了阳性克隆，现在建议你做一下试剂盒提供的对照，如果没有问题，就说明的目的片段的浓度和载体的配比或者是目的片段太长，连接失败造成的。 但就目前的情况看，你连蓝斑都看不见了，估计你做对照也不一定能行，所以很有可能是你的培养基或者抗性之类的出问题了，好好检查一下 |
3楼2010-04-29 15:02:53
shengwufenzi
金虫 (正式写手)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 464.5
- 红花: 1
- 帖子: 505
- 在线: 161.2小时
- 虫号: 993723
- 注册: 2010-04-10
- 专业: 生物大分子结构与功能
4楼2010-04-29 15:54:44
