[交流] 【求助/交流】测序问题，求助高手。

Originally posted by yixuanwin at 2010-11-06 15:01:54:
测错了。 我测序也会遇到这样的。 假阳性克隆。
本文来自: 小木虫论坛 http://muchong.com/bbs/viewthread.php?tid=2567462&fpage=1

Originally posted by zhaohu200801 at 2010-11-06 18:20:38:

长出来的菌不多，而且还挺小的，那到底是什么原因造成的假阳性克隆啊？是简并引物设计的不对吗？还是模板的问题啊？都研三了，实验做了一年多了还没点进展，急！

Originally posted by 胖无名 at 2010-11-06 22:23:18:
这个原因可多了，1 你测序是测通还是单向，2 克隆的片段多大，如果片段较长而又是单向测序的话，只找到一个引物是不足为奇的，3 送去测序的样品有没有经过酶切验证或菌落PCR验证，4 你是哪家给测的序，测错也不是 ...

Originally posted by yixuanwin at 2010-11-06 21:25:20:


1  感受态质量

2  连接效率

3  片段长短

4  抗生素浓度

5  其他操作


1235会造成假阳性，1-5会造成菌少且小。

克隆的不好，关引物设计什么事情。 引物设计的pcr产物，在连接前不应该有确认 ...