应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】测序问题，求助高手。
91/1返回列表
查看: 1767  |  回复: 8
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

zhaohu200801

新虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】测序问题，求助高手。

做TA克隆时，测序结果只找到上游引物，找不到下游引物。经过BLast，相似度只有30%，不知道什么原因。
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2010-11-06 11:56:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yynzcx

银虫 (小有名气)
恭喜！恭喜！
本文来自: 小木虫论坛 http://muchong.com/bbs/viewthread.php?tid=2565295
赞一下 回复此楼
2楼2010-11-06 12:43:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yixuanwin

铁杆木虫 (正式写手)
zhaohu200801(金币+1):哦，谢谢 2010-11-06 18:12:06
zhaohu200801(金币+1):再送你一个 2010-11-06 18:21:57
测错了。 我测序也会遇到这样的。 假阳性克隆。
本文来自: 小木虫论坛 http://muchong.com/bbs/viewthread.php?tid=2567462&fpage=1
赞一下 回复此楼
3楼2010-11-06 15:01:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhaohu200801

新虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by yixuanwin at 2010-11-06 15:01:54:
测错了。 我测序也会遇到这样的。 假阳性克隆。
本文来自: 小木虫论坛 http://muchong.com/bbs/viewthread.php?tid=2567462&fpage=1

长出来的菌不多，而且还挺小的，那到底是什么原因造成的假阳性克隆啊？是简并引物设计的不对吗？还是模板的问题啊？都研三了，实验做了一年多了还没点进展，急！
赞一下 回复此楼
4楼2010-11-06 18:20:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yixuanwin

铁杆木虫 (正式写手)
★ ★ ★ ★ ★
scelab(金币+5):热心虫友，欢迎多来交流~~~:tiger06::tiger28::tiger23: 2010-11-06 23:51:31
zhaohu200801(金币+1):谢谢 2010-11-07 14:19:10
引用回帖:
Originally posted by zhaohu200801 at 2010-11-06 18:20:38:

长出来的菌不多，而且还挺小的，那到底是什么原因造成的假阳性克隆啊？是简并引物设计的不对吗？还是模板的问题啊？都研三了，实验做了一年多了还没点进展，急！

1  感受态质量

2  连接效率

3  片段长短

4  抗生素浓度

5  其他操作


1235会造成假阳性，1-5会造成菌少且小。

克隆的不好，关引物设计什么事情。 引物设计的pcr产物，在连接前不应该有确认么？ 模板的确认也是pcr那步该做的。
赞一下(1人) 回复此楼
5楼2010-11-06 21:25:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

胖无名

金虫 (正式写手)
★ ★ ★
scelab(金币+3):热心虫友，欢迎多来交流~~~:tiger06::tiger28::tiger23: 2010-11-06 23:51:41
zhaohu200801(金币+1):谢谢 2010-11-07 14:19:36
这个原因可多了，1 你测序是测通还是单向，2 克隆的片段多大，如果片段较长而又是单向测序的话，只找到一个引物是不足为奇的，3 送去测序的样品有没有经过酶切验证或菌落PCR验证，4 你是哪家给测的序，测错也不是没有可能
赞一下(1人) 回复此楼
6楼2010-11-06 22:23:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhaohu200801

新虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by 胖无名 at 2010-11-06 22:23:18:
这个原因可多了，1 你测序是测通还是单向，2 克隆的片段多大，如果片段较长而又是单向测序的话，只找到一个引物是不足为奇的，3 送去测序的样品有没有经过酶切验证或菌落PCR验证，4 你是哪家给测的序，测错也不是 ...

我是测通，克隆片段不大，350bp左右，送去测序的样品经过了酶切验证和菌落PCR验证，都还不错，是华大基因公司给测的序，难道测错了？通过比对，相似度才只有30%。
赞一下 回复此楼
7楼2010-11-07 19:33:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhaohu200801

新虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by yixuanwin at 2010-11-06 21:25:20:


1  感受态质量

2  连接效率

3  片段长短

4  抗生素浓度

5  其他操作


1235会造成假阳性，1-5会造成菌少且小。

克隆的不好，关引物设计什么事情。 引物设计的pcr产物，在连接前不应该有确认 ...

pcr产物第一次没扩出来，二次扩增才扩出来，还挺亮的，关键是测序结果一比对，才只有30%左右的相似度，所以我才怀疑是在设计简并引物的时候出的问题，我克隆的是未知序列的基因。
赞一下 回复此楼
8楼2010-11-07 19:39:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

love三人游

新虫 (初入文坛)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
我的也是华大测得，也是相似性很高，但是我得到反向互补序列之后相似性很高，策反了没有啊
赞一下(1人) 回复此楼
9楼2012-01-05 21:14:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 zhaohu200801 的主题更新
91/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +3 ZYXdhzDAy9ZX 2026-09-28 3/150 2026-09-29 06:42 by ZvyPK8n6Nfki
[找工作] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +3 ZYXdhzDAy9ZX 2026-09-28 3/150 2026-09-29 06:34 by ZvyPK8n6Nfki
[找工作] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +3 ZYXdhzDAy9ZX 2026-09-28 3/150 2026-09-29 06:28 by ZvyPK8n6Nfki
[考博] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 ZYXdhzDAy9ZX 2026-09-28 3/150 2026-09-29 06:18 by ZvyPK8n6Nfki
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 tqUTOxClQUMF 2026-09-28 3/150 2026-09-28 23:46 by b8fCuTHqckEt
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 GDBe8tDZqE8z 2026-09-28 4/200 2026-09-28 23:19 by b8fCuTHqckEt
[考研] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 GDBe8tDZqE8z 2026-09-28 3/150 2026-09-28 23:12 by b8fCuTHqckEt
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 CfXuS1rDhLYN 2026-09-28 4/200 2026-09-28 22:55 by ez6fGg9abYaj
[公派出国] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +4 IDs3scOF0tjC 2026-09-28 4/200 2026-09-28 22:55 by ez6fGg9abYaj
[博后之家] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +4 IDs3scOF0tjC 2026-09-28 5/250 2026-09-28 22:45 by ez6fGg9abYaj
[有机交流] 同一个分子，一条来自文献，一条来自AI——不告诉你答案，你会选哪条？ +3 tianxiaoxian 2026-09-28 6/300 2026-09-28 22:44 by tianxiaoxian
[找工作] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +3 IDs3scOF0tjC 2026-09-28 5/250 2026-09-28 22:32 by ez6fGg9abYaj
[公派出国] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +3 IDs3scOF0tjC 2026-09-28 4/200 2026-09-28 22:28 by ez6fGg9abYaj
[博后之家] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +3 IDs3scOF0tjC 2026-09-28 3/150 2026-09-28 22:21 by ez6fGg9abYaj
[考博] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +3 IDs3scOF0tjC 2026-09-28 6/300 2026-09-28 22:15 by ez6fGg9abYaj
[论文投稿] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 CfXuS1rDhLYN 2026-09-28 3/150 2026-09-28 19:08 by 9lS3ad5oOymn
[考研] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +3 IDs3scOF0tjC 2026-09-28 4/200 2026-09-28 18:51 by 9lS3ad5oOymn
[找工作] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +4 IDs3scOF0tjC 2026-09-28 4/200 2026-09-28 17:30 by ZYXdhzDAy9ZX
[教师之家] 某top大学教授说“能够在市场中兑现的能力才是真能力”无比同意！ +7 zju2000 2026-09-26 8/400 2026-09-28 16:42 by beefly
[教师之家] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +3 GDBe8tDZqE8z 2026-09-28 3/150 2026-09-28 15:32 by ZYXdhzDAy9ZX
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭