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wxy0601

新虫 (初入文坛)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 29.5
帖子: 1
在线: 5.1小时
虫号: 1448742
注册: 2011-10-18
专业: 电化学

[求助] 跪求高手求助，急急急，细菌提取DNA 问题

最近一直在做菌株鉴定试验，自己提的DNA ，跑电泳条带很亮，做PCR跑电泳也有条带，可是宋测序公司回来的结果很奇怪，接连几次送的样出来的序列都是一样的，但是样品本来是有球菌有杆菌的，后来拿水做对照，也能批出来，引物，水，buffer都跑过电泳了，上游引物出了一次条带，再做又没有条带了，很奇怪，到底是哪有问题呢，郁闷了好久了，哪位高手帮忙解决一下？
今天用天根的细菌DNA提取试剂盒体DNA ，跑电泳只出来2个，（一共做了9个），之前我不小心把试剂盒放冰箱了（-20）会不会低温影响了提取效果啊？泪求解答！！！！！！！！

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1楼 2011-10-18 15:52:17

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lxj341401

至尊木虫 (著名写手)

MolEPI: 58
应助: 388 (硕士)
贵宾: 0.238
金币: 17138.7
红花: 43
帖子: 2251
在线: 712.4小时
虫号: 111074
注册: 2005-11-20
专业: 生物化学

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
西瓜(金币+4, MolEPI-1): Good！ 2011-10-19 18:42:09
西瓜(MolEPI+1): 操作失误，对不起啊！ 2011-10-20 10:08:22
西瓜(MolEPI+1): 补上 2011-10-20 10:08:32

拿水做对照，也能批出来说明你的其中一个试剂污染了，因为只要极少量的污染就可以导致这样的结果，水，buffer都跑电泳了没有条带不弄说明没有污染，量少跑不出来的。建议把所有试剂包括水换掉试试。

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2楼2011-10-19 07:55:05

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NDA提取

新虫 (初入文坛)

应助: 0 (幼儿园)
金币: -0.1
帖子: 10
在线: 41分钟
虫号: 1496370
注册: 2011-11-17
性别: GG
专业: 生物大分子结构与功能

【答案】应助回帖

西瓜: 本版是不允许发广告的，这次先提醒，下次就要扣金币了哦 2011-11-17 19:11:48

有机会可以用下俺家高通量组织研磨器. 可以在DNA RNA提取过程中代替液氮手动研磨, 只需把物料和研磨球加入1.5/2ml离心管中，离心管放入我们提供的耐低温适配器上，把适配器和夹具放入液氮中，冷冻3-5分钟，取出，加裂解液（也可不加），即可进行研磨。每台研磨仪配2个适配器，每个适配器可以放的1.5/2ml离心管的数量是24个，这样2个适配器同时工作，即可一次研磨48个样品，这些样品的研磨在2-3min内即可研磨完成，时间短，效率高。

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高通量组织研磨仪-DNA/RNA提取利器!

3楼2011-11-17 15:21:09

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longrna

新虫 (正式写手)

MolEPI: 7
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帖子: 340
在线: 97.2小时
虫号: 1473815
注册: 2011-11-03
性别: GG
专业: 生物化学

这句话是什么意思啊？“引物，水，buffer都跑过电泳了，上游引物出了一次条带，再做又没有条带了”
怎么引物、水、buffer都跑电泳去了？

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伟大航线....

4楼2011-11-17 18:04:31

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flyme8373

银虫 (初入文坛)

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注册: 2009-02-28
性别: GG
专业: 生物信息学

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1

对啊电泳检测的灵敏度很低的没有条带不代表没有DNA的很可能是试剂污染了

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惠泽天下尔我同行

5楼2012-04-05 10:41:02

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hyacinth326

金虫 (正式写手)

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注册: 2011-11-21
性别: MM
专业: 微生物资源与分类学

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
西瓜: 金币+2, 鼓励交流～最近很活跃啊 2012-04-05 18:27:35

遇到这种问题，最好的办法就是把所有的试剂都换一下，与其一个一个的排出原因还不如直接换了，不浪费时间。。。做菌株鉴定，不管gram positive还是gram negative的只要是提出一点基因组DNA就没有问题，一般的试剂盒都行，手提也可以，我们提单菌的有时候就根本不用溶菌酶处理，而是直接离心菌体，煮沸，然后去蛋白什么的，一点问题都没有~~

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6楼2012-04-05 11:09:11

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