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zhaohu200801

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[交流] 【求助/交流】测序问题，求助高手。

做TA克隆时，测序结果只找到上游引物，找不到下游引物。经过BLast，相似度只有30%，不知道什么原因。

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1楼 2010-11-06 11:56:44

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zhaohu200801

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引用回帖:

Originally posted by yixuanwin at 2010-11-06 21:25:20:

1  感受态质量

2  连接效率

3  片段长短

4  抗生素浓度

5  其他操作

1235会造成假阳性，1-5会造成菌少且小。

克隆的不好，关引物设计什么事情。引物设计的pcr产物，在连接前不应该有确认 ...

pcr产物第一次没扩出来，二次扩增才扩出来，还挺亮的，关键是测序结果一比对，才只有30%左右的相似度，所以我才怀疑是在设计简并引物的时候出的问题，我克隆的是未知序列的基因。