版块导航: 正在加载中...

登录注册

应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜

返回列表

kakaqa

铜虫 (初入文坛)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 91.8
帖子: 11
在线: 13.2小时
虫号: 997081

[交流] 【求助/交流】测序问题

最近一直在做连接转化，3000bp左右的片段用pMD18-T easy vector连，之前一直连不上，现在好了，有几个连上的，大小也差不多，可是测序结果确是在一开始两个引物就连在一起，在末端还有引物，最后比对结果是载体序列，请问这是为什么啊，难道是引物自连了，还是测序的问题？请高手指教！

回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:

pcr产物测序问题已经有10人回复
测序的问题已经有24人回复
16S rDNA测序问题已经有3人回复
DEEG条带测序问题已经有7人回复
【求助/交流】克隆测序问题已经有6人回复
【求助/交流】PCR产物做克隆，测序出现问题。已经有13人回复
【求助/交流】菌液测序问题已经有10人回复

» 抢金币啦！回帖就可以得到:

查看全部散金贴

1楼 2010-12-08 09:15:38

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

adslye

银虫 (正式写手)

★ ★ ★
kakaqa(金币+1):谢谢参与
rainwander(金币+2):鼓励积极参与~~~ 2010-12-08 10:33:01

引用回帖:

Originally posted by kakaqa at 2010-12-08 09:15:38:
最近一直在做连接转化，3000bp左右的片段用pMD18-T easy vector连，之前一直连不上，现在好了，有几个连上的，大小也差不多，可是测序结果确是在一开始两个引物就连在一起，在末端还有引物，最后比对结果是载体序 ...

我也是新手，谈谈我的看法。给你顶一下。
你说的引物是测序引物还是PCR引物？
如果是PCR引物，你的意思是测序发现两个引物连到一起了？然后后面接着载体序列，后面还有PCR引物？
好诡异，如果这样我也不知道是怎么来的。。。我感觉以上理解不对。

如果是测序引物，是不是载体自连了。。。

诡异，重新测序看下吧。我没出现过这样的情况。上海英俊测的。

赞一下(2人)

回复此楼

2楼2010-12-08 09:49:41

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

pidou213

木虫 (正式写手)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 2446.1
帖子: 913
在线: 45.9小时
虫号: 448545

★ ★ ★
kakaqa(金币+1):谢谢参与
rainwander(金币+2):鼓励积极参与~~~ 2010-12-08 10:33:08

请确保，
1、目的片段是纯的，无污染的，在3000bp的，希望你能切胶后回收在电泳检测一下
2、连接不成功的可能性为载体与目的片段的比例不合适，每个试剂盒都有规定的最佳比例，请用紫外或者marker的目测结果，来配制载体和目的片段的加入量。从而达到最优化，希望楼主试一试

赞一下(2人)

回复此楼

3楼2010-12-08 09:56:18

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

kakaqa

铜虫 (初入文坛)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 91.8
帖子: 11
在线: 13.2小时
虫号: 997081

关于测序问题

引用回帖:

Originally posted by adslye at 2010-12-08 09:49:41:
我也是新手，谈谈我的看法。给你顶一下。
你说的引物是测序引物还是PCR引物？
如果是PCR引物，你的意思是测序发现两个引物连到一起了？然后后面接着载体序列，后面还有PCR引物？
好诡异，如果这样我也不知 ...

是我的PCR引物，我也感觉很郁闷的，我怀疑是测序的问题，其实我以前也遇到过这种问题，不过因为当时只有1个样是，其他的都正确就没有在意，可是这次全是这样的，我是在华大测的，师兄建议我送生工测下。

赞一下

回复此楼

4楼2010-12-08 09:59:13

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖