应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】测序问题
51/1返回列表
查看: 1093  |  回复: 8
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

kakaqa

铜虫 (初入文坛)

[交流] 【求助/交流】测序问题

最近一直在做连接转化，3000bp左右的片段用pMD18-T easy vector连，之前一直连不上，现在好了，有几个连上的，大小也差不多，可是测序结果确是在一开始两个引物就连在一起，在末端还有引物，最后比对结果是载体序列，请问这是为什么啊，难道是引物自连了，还是测序的问题？请高手指教！
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:

» 抢金币啦！回帖就可以得到:

查看全部散金贴
1楼 2010-12-08 09:15:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gongeleven

铁杆木虫 (正式写手)
★
kakaqa(金币+1):谢谢参与
估计还是没连接上吧，不知道lz怎么确定连接上了？
赞一下(1人) 回复此楼
5楼2010-12-08 10:01:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 9 个回答

adslye

银虫 (正式写手)
★ ★ ★
kakaqa(金币+1):谢谢参与
rainwander(金币+2):鼓励积极参与~~~ 2010-12-08 10:33:01
引用回帖:
Originally posted by kakaqa at 2010-12-08 09:15:38:
最近一直在做连接转化，3000bp左右的片段用pMD18-T easy vector连，之前一直连不上，现在好了，有几个连上的，大小也差不多，可是测序结果确是在一开始两个引物就连在一起，在末端还有引物，最后比对结果是载体序 ...

我也是新手，谈谈我的看法。给你顶一下。
你说的引物是测序引物还是PCR引物？
如果是PCR引物，你的意思是测序发现两个引物连到一起了？然后后面接着载体序列，后面还有PCR引物？
好诡异，如果这样我也不知道是怎么来的。。。我感觉以上理解不对。

如果是测序引物，是不是载体自连了。。。

诡异，重新测序看下吧。我没出现过这样的情况。上海英俊测的。
赞一下(2人) 回复此楼
2楼2010-12-08 09:49:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

pidou213

木虫 (正式写手)
★ ★ ★
kakaqa(金币+1):谢谢参与
rainwander(金币+2):鼓励积极参与~~~ 2010-12-08 10:33:08
请确保，
1、目的片段是纯的，无污染的，在3000bp的，希望你能切胶后回收在电泳检测一下
2、连接不成功的可能性为载体与目的片段的比例不合适，每个试剂盒都有规定的最佳比例，请用紫外或者marker的目测结果，来配制载体和目的片段的加入量。从而达到最优化，希望楼主试一试
赞一下(2人) 回复此楼
3楼2010-12-08 09:56:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

kakaqa

铜虫 (初入文坛)

关于测序问题

引用回帖:
Originally posted by adslye at 2010-12-08 09:49:41:
    我也是新手，谈谈我的看法。给你顶一下。
你说的引物是测序引物还是PCR引物？
如果是PCR引物，你的意思是测序发现两个引物连到一起了？然后后面接着载体序列，后面还有PCR引物？
好诡异，如果这样我也不知 ...

是我的PCR引物，我也感觉很郁闷的，我怀疑是测序的问题，其实我以前也遇到过这种问题，不过因为当时只有1个样是，其他的都正确就没有在意，可是这次全是这样的，我是在华大测的，师兄建议我送生工测下。
赞一下 回复此楼
4楼2010-12-08 09:59:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 9 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭