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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】测序问题
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kakaqa

铜虫 (初入文坛)

[交流] 【求助/交流】测序问题

最近一直在做连接转化，3000bp左右的片段用pMD18-T easy vector连，之前一直连不上，现在好了，有几个连上的，大小也差不多，可是测序结果确是在一开始两个引物就连在一起，在末端还有引物，最后比对结果是载体序列，请问这是为什么啊，难道是引物自连了，还是测序的问题？请高手指教！
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1楼2010-12-08 09:15:38
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pidou213

木虫 (正式写手)
★ ★ ★
kakaqa(金币+1):谢谢参与
rainwander(金币+2):鼓励积极参与~~~ 2010-12-08 10:33:08
请确保，
1、目的片段是纯的，无污染的，在3000bp的，希望你能切胶后回收在电泳检测一下
2、连接不成功的可能性为载体与目的片段的比例不合适，每个试剂盒都有规定的最佳比例，请用紫外或者marker的目测结果，来配制载体和目的片段的加入量。从而达到最优化，希望楼主试一试
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3楼2010-12-08 09:56:18
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