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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » DEEG条带测序问题
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hitliutao

银虫 (小有名气)

[求助] DEEG条带测序问题

各位高手，本人目前正在做DGGE，使用的是银染进行染色，对DGGE电泳单一条带切割回收后，再扩增测序，但是测序结果有杂峰，说明PCR出来的结果不是单一条带，这就很奇怪，因为模板是DGGE的单一条带。我想请教各位高手，在如何获得单一条带这方面,有什么建议么?难道非得进行克隆转化测质粒么，那对于多条带图谱来说，就太麻烦了吧。
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1楼 2011-04-21 11:22:00
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hitliutao

银虫 (小有名气)
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2楼2011-04-21 14:27:52
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xiadongliang

金虫 (正式写手)
★
reasonspare(金币+1): 积极交流奖 2011-04-26 11:16:05
绝大多数都克隆测序。
就别嫌麻烦了
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3楼2011-04-21 17:07:26
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hitliutao

银虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by xiadongliang at 2011-04-21 17:07:26:
绝大多数都克隆测序。
就别嫌麻烦了

的确克隆测序结果好很多,但一想想这个过程真的很恐怖啊
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4楼2011-04-22 09:13:00
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xiadongliang

金虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by hitliutao at 2011-04-22 09:13:00:
的确克隆测序结果好很多,但一想想这个过程真的很恐怖啊

还好吧。不是特别麻烦。做好了也就3天时间。
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5楼2011-04-22 10:42:36
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warrrraw

禁虫 (小有名气)
hitliutao(金币+2): 2011-04-22 19:41:07
本帖内容被屏蔽
6楼2011-04-22 11:13:25
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惟我独尊

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
reasonspare(金币+1): 积极交流奖 2011-04-26 11:16:27
按道理来说确实应该克隆测序的，不过你也可以尝试一下这么做：跑完第一次ＤＧＧＥ后，割胶提DNA后，PCR，然后再跑一次ＤＧＧＥ，确定是单一条带的话再进行割胶测序。
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7楼2011-04-26 09:51:38
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shajunji

木虫 (小有名气)
引用回帖:
1123754楼: Originally posted by 惟我独尊 at 2011-04-26 09:51:38:
按道理来说确实应该克隆测序的，不过你也可以尝试一下这么做：跑完第一次ＤＧＧＥ后，割胶提DNA后，PCR，然后再跑一次ＤＧＧＥ，确定是单一条带的话再进行割胶测序。

您好，我想问一下，克隆测序是不是不必多次跑DGGE，一次就够了吗？
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8楼2012-04-21 23:21:38
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