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hitliutao

银虫 (小有名气)

[求助] DEEG条带测序问题

各位高手,本人目前正在做DGGE,使用的是银染进行染色,对DGGE电泳单一条带切割回收后,再扩增测序,但是测序结果有杂峰,说明PCR出来的结果不是单一条带,这就很奇怪,因为模板是DGGE的单一条带。我想请教各位高手,在如何获得单一条带这方面,有什么建议么?难道非得进行克隆转化测质粒么,那对于多条带图谱来说,就太麻烦了吧。
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shajunji

木虫 (小有名气)

引用回帖:
1123754楼: Originally posted by 惟我独尊 at 2011-04-26 09:51:38:
按道理来说确实应该克隆测序的,不过你也可以尝试一下这么做:跑完第一次DGGE后,割胶提DNA后,PCR,然后再跑一次DGGE,确定是单一条带的话再进行割胶测序。

您好,我想问一下,克隆测序是不是不必多次跑DGGE,一次就够了吗?
8楼2012-04-21 23:21:38
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xiadongliang

金虫 (正式写手)


reasonspare(金币+1): 积极交流奖 2011-04-26 11:16:05
绝大多数都克隆测序。
就别嫌麻烦了
3楼2011-04-21 17:07:26
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hitliutao

银虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by xiadongliang at 2011-04-21 17:07:26:
绝大多数都克隆测序。
就别嫌麻烦了

的确克隆测序结果好很多,但一想想这个过程真的很恐怖啊
4楼2011-04-22 09:13:00
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xiadongliang

金虫 (正式写手)

引用回帖:
Originally posted by hitliutao at 2011-04-22 09:13:00:
的确克隆测序结果好很多,但一想想这个过程真的很恐怖啊

还好吧。不是特别麻烦。做好了也就3天时间。
5楼2011-04-22 10:42:36
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