应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 【求助】关于测序的大问题！！！
191/1返回列表
查看: 1999  |  回复: 18
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
本帖产生 1 个 BioEPI ，点击这里进行查看

hkfgwww

银虫 (正式写手)

[交流] 【求助】关于测序的大问题！！！

我有一个purF基因的序列在华大公司测序两次，这个片段连上T载体后前后两次测序结果不相同（有4个碱基突变，两次测序时间不同，不是同一批次的），这是什么原因呢？是测序的问题还是我实验的问题，并且这种情况经常遇见（以前的prs基因序列也有这种问题），我该如何解决呢？难道进行第三次测序？
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:

» 抢金币啦！回帖就可以得到:

查看全部散金贴
1楼 2011-04-10 16:02:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

blackrose8089

铁杆木虫 (职业作家)
hkfgwww(金币+2): 2011-04-10 16:43:30
楼主可以参考一下测序的峰图分析一下！
赞一下 回复此楼
2楼2011-04-10 16:07:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hkfgwww

银虫 (正式写手)
лл
回复此楼
3楼2011-04-10 16:44:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gene001

金虫 (正式写手)
hkfgwww(金币+2): 2011-04-13 14:28:12
1、PCR产物是否同一批的？要是同一批，就应该好好分析测序结果图（峰图）！
2、四个不同碱基是否导致编码氨基酸的改变？如果没有，你用该序列应该不会有问题，要是氨基酸改变了，你真得重新测序！
赞一下 回复此楼
4楼2011-04-11 18:41:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

forrestgump

新虫 (著名写手)
hkfgwww(金币+2): 2011-04-13 14:29:59
我感觉你的测序的结果可能是突变造成的。
赞一下 回复此楼
5楼2011-04-11 21:58:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xp198766

铁杆木虫 (著名写手)
hkfgwww(金币+1): 2011-04-13 14:29:26
多测几遍，一般华大会保存菌种一段时间的，你问下，看他们还有没有。。
赞一下 回复此楼
6楼2011-04-11 22:00:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xujian568

至尊木虫 (著名写手)
★ ★
hkfgwww(金币+4): 2011-04-13 14:31:32
silicare(金币+2, EPI+1): 在理 2011-04-15 08:20:08
首先，关于你的克隆来源的问题。可能性之一是，本来就有不一样的。第二，（RT）PCR时用的是什么酶？taq还是别的？总的来说，千分之5左右的差异突变的概率是有的。第三，质粒或菌夜送测样品的质量。当然，最后就是测序的问题了。
如果你要找差异，那么最好保证每一步都是完美的，包括试剂。比对你的结果，是不是同义替换？多送几个样品也是一个没有办法的办法。相同克隆的，不同克隆的。
赞一下(1人) 回复此楼
7楼2011-04-12 01:27:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

路人甲007

木虫 (正式写手)
hkfgwww(金币+1): 2011-04-13 14:32:08
换家公司试试嘛
回复此楼
8楼2011-04-12 20:00:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hkfgwww

银虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by gene001 at 2011-04-11 18:41:31:
1、PCR产物是否同一批的？要是同一批，就应该好好分析测序结果图（峰图）！
2、四个不同碱基是否导致编码氨基酸的改变？如果没有，你用该序列应该不会有问题，要是氨基酸改变了，你真得重新测序！

1: PCR产物不是同一批，峰图已经分析没有问题。
2：四个碱基导致了四个氨基酸的突变，哎。
赞一下 回复此楼
9楼2011-04-13 14:29:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hkfgwww

银虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by forrestgump at 2011-04-11 21:58:11:
我感觉你的测序的结果可能是突变造成的。

是那一部分造成的突变呢？
赞一下 回复此楼
10楼2011-04-13 14:30:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hkfgwww

银虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by 路人甲007 at 2011-04-12 20:00:14:
换家公司试试嘛

呵呵，花大基因应该不会有问题吧。
赞一下 回复此楼
11楼2011-04-13 14:30:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hkfgwww

银虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by xujian568 at 2011-04-12 01:27:36:
首先，关于你的克隆来源的问题。可能性之一是，本来就有不一样的。第二，（RT）PCR时用的是什么酶？taq还是别的？总的来说，千分之5左右的差异突变的概率是有的。第三，质粒或菌夜送测样品的质量。当然，最后就是 ...

基因组是同一批，用的保真酶。


～～～～～～～～～～～～～～～～～～
第三，质粒或菌夜送测样品的质量

这个与样品的质量相关吗？
赞一下 回复此楼
12楼2011-04-13 14:33:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

路人甲007

木虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by hkfgwww at 2011-04-13 14:30:44:
呵呵，花大基因应该不会有问题吧。

可以换个试试  我没有说哪个公司不好
赞一下 回复此楼
13楼2011-04-13 16:08:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gene001

金虫 (正式写手)
hkfgwww(金币+1): 2011-04-14 13:38:24
引用回帖:
Originally posted by hkfgwww at 2011-04-13 14:29:05:
1: PCR产物不是同一批，峰图已经分析没有问题。
2：四个碱基导致了四个氨基酸的突变，哎。

你所比对的标准序列来源是不是和你扩增的模版来源同一个种生物？该基因在不同种属间会不会存在一些差异？
赞一下 回复此楼
14楼2011-04-13 19:56:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

空谷幽风

金虫 (正式写手)
hkfgwww(金币+4): 2011-04-14 13:38:13
出现这样的结果是非常正常的，一般不是测序的问题，造成这种现象的原因是：
1.在进行PCR扩增的时候，是会随机引入突变的，所以你得到的并非都是序列完全正确的片段，因此长出来的阳性克隆也并非每个都是完全正确的。
2.重组质粒在受体细胞中扩增的时候会受到受体细胞内很多酶的调控和修饰，最常见的现象是很多高度重复的片段丢失了

所以只有测序完全正确的才是你要的克隆，不正确的赶紧丢掉吧
赞一下 回复此楼
15楼2011-04-14 12:44:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hkfgwww

银虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by 空谷幽风 at 2011-04-14 12:44:00:
出现这样的结果是非常正常的，一般不是测序的问题，造成这种现象的原因是：
1.在进行PCR扩增的时候，是会随机引入突变的，所以你得到的并非都是序列完全正确的片段，因此长出来的阳性克隆也并非每个都是完全正确 ...

谢谢，这个问题还真得注意。
赞一下 回复此楼
16楼2011-04-14 13:38:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zgb1982

木虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by 空谷幽风 at 2011-04-14 12:44:00:
出现这样的结果是非常正常的，一般不是测序的问题，造成这种现象的原因是：
1.在进行PCR扩增的时候，是会随机引入突变的，所以你得到的并非都是序列完全正确的片段，因此长出来的阳性克隆也并非每个都是完全正确 ...

不见得完全是这样吧。要看对比的模板是不是完全相同了，我遇到过这种情况啊，三次以上的扩增比对，每次都重新提RNA反转的，结果都在相同的地方出现突变
赞一下 回复此楼
17楼2011-04-14 21:25:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

空谷幽风

金虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by zgb1982 at 2011-04-14 21:25:46:
不见得完全是这样吧。要看对比的模板是不是完全相同了，我遇到过这种情况啊，三次以上的扩增比对，每次都重新提RNA反转的，结果都在相同的地方出现突变

你所谓的比对模板就是标准序列吧，如果你练标准序列都弄错的话我也无话可说了
赞一下 回复此楼
18楼2011-04-15 08:43:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lixg

铁杆木虫 (正式写手)
hkfgwww(金币+1): 2011-04-25 19:30:18
这样看来，问题可能出在PCR时用的酶上，建议用高或超保真酶再扩一下。
赞一下 回复此楼
19楼2011-04-15 09:05:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 hkfgwww 的主题更新
191/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 东南大学364求调剂 +4 JasonYuiui 2026-03-15 4/200 2026-03-16 08:36 by Linda Hu
[考研] 274求调剂 +4 时间点 2026-03-13 4/200 2026-03-15 15:29 by Rambo13
[考研] 297一志愿上交085600求调剂 +5 指尖八千里 2026-03-14 5/250 2026-03-14 17:26 by a不易
[考研] 297求调剂 +4 学海漂泊 2026-03-13 4/200 2026-03-14 11:51 by 热情沙漠
[考研] 308 085701 四六级已过求调剂 +7 温乔乔乔乔 2026-03-12 14/700 2026-03-14 10:49 by JourneyLucky
[考研] 学硕285求调剂 +13 Wisjxn 2026-03-12 46/2300 2026-03-14 10:33 by JourneyLucky
[考研] 312求调剂 +6 陌宸希 2026-03-10 6/300 2026-03-14 00:40 by JourneyLucky
[考研] 一志愿华中农业大学071010，总分三百二,求调剂 +3 困困困困坤坤 2026-03-10 3/150 2026-03-14 00:35 by JourneyLucky
[考研] 2026考研调剂+本科延边大学+山东大学+生物化学与分子生物学+有项目经验 +3 ccdsscjy 2026-03-10 3/150 2026-03-14 00:12 by JourneyLucky
[考研] 285 求调剂 资源与环境 一志愿北京化工大学 +3 未名考生 2026-03-10 3/150 2026-03-13 23:04 by JourneyLucky
[考研] 304求调剂 +6 Mochaaaa 2026-03-12 7/350 2026-03-13 22:18 by 星空星月
[考研] 材料与化工085600调剂求老师收留 +9 jiaanl 2026-03-11 9/450 2026-03-13 20:22 by JourneyLucky
[考研] 310求调剂 +3 【上上签】 2026-03-11 3/150 2026-03-13 16:16 by JourneyLucky
[考研] 工科调剂 +4 Jiang191123！ 2026-03-11 4/200 2026-03-13 15:15 by Miko19
[考研] 求调剂 +3 程雨杭 2026-03-12 3/150 2026-03-13 15:06 by JourneyLucky
[考研] 材料301分求调剂 +5 Liyouyumairs 2026-03-12 5/250 2026-03-13 14:42 by JourneyLucky
[考研] 268求调剂 +4 好运连绵不绝 2026-03-12 4/200 2026-03-13 10:45 by hyswxzs
[考博] 读博申请 +5 感dd 2026-03-10 7/350 2026-03-11 17:02 by QGZDSYS
[考研] 0857环境调剂 +5 熠熠_11 2026-03-10 5/250 2026-03-11 10:59 by wang_dand
[考研] 298求调剂 +3 Vv呀！ 2026-03-10 3/150 2026-03-10 22:40 by 剑诗杜康
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭